基于适配体放大技术检测microRNA

摘要

MicroRNA是一类细胞内源性的非蛋白编码的小分子RNA，它通过调控蛋白表达在生命过程中起着重要的作用。MicroRNA的分析对进一步研究其生物功能及疾病诊断都具有重要的意义。
　　适配体是一类新的具有类似抗体识别功能的核酸分子，比传统抗体更稳定，保存时间长，可以进行多种修饰。孔雀石绿适配体（MGA）是由38个核糖核苷酸构成的一段RNA序列。孔雀石绿（MG）是一种三苯甲烷类染料，由于不具备分子刚性结构而没有荧光。孔雀石绿能够与孔雀石绿适配体特异性结合形成三维空间结构，起到固定孔雀石绿平面结构的作用，从而使孔雀石绿产生强的荧光发射。
　　本论文中我们建立了一种基于适配体放大技术方法来检测miR-143。首先根据目标miR-143序列设计扩增模板，该模板包括：目标miR-143互补序列，T7RNA聚合酶启动子序列和孔雀石绿适配体互补序列。当目标分析物miR-143存在时，miR-143与模板杂交，在Bst聚合酶作用下延伸产生T7启动子，T7RNA聚合酶能够识别T7启动子，并以含有T7启动子的双链DNA为模板，合成RNA孔雀石绿适配体。孔雀石绿适配体与孔雀石绿结合后在650nm处发射荧光。该方法可以定量检测到50pmol/L的miR-143，具有4个数量级的动态范围。该方法放大与检测同时进行，操作简便，费用低，所以该方法在microRNA分析方面具有很好的应用前景。

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第1章 引 言

1.1 miRNA分析方法简介

1.2 核酸适配体简介

第2章 基于适配体放大技术检测microRNA

2.1 前言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

参考文献

致 谢

攻读学位期间取得的科研成果