IL-7联合IL-2对脐血CD4+CD25-T细胞体外诱导扩增影响的研究

摘要

背景:目前世界上常见的自身免疫性疾病有类风湿性关节炎、甲状腺炎、白癜风、恶性贫血、Ⅰ型糖尿病和全身性红斑狼疮等,且都与体内CD4+CD25+调节性 T细胞的数量密切相关,研究证实疾病活动度越高的患者,其体内CD4+CD25+调节性T细胞数量越低。因此,将CD4+CD25+调节性T细胞应用于自身免疫性疾病的过继免疫治疗具有十分重要的意义,但由于CD4+CD25+Tregs在体内增殖活性低下,其存在比例和绝对数量极低,且诱导产生的CD4+CD25+调节性T细胞中Foxp3表达不稳定,使CD4+CD25+调节性 T细胞的来源问题成为了自身免疫性疾病治疗的瓶颈,从而限制了 CD4+CD25+调节性T细胞的临床应用。因此,本研究致力于建立一种体外诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的培养体系,为CD4+CD25+调节性T细胞的临床应用奠定基础。
　　方法:采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞;加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL-2作为诱导剂,分析IL-7体外诱导CD4+CD25-T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CD4+CD25-T细胞表型变化;MTS法检测体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs分别对成人外周血中单个核细胞脐血CIK增殖的抑制作用;RT-PCR方法分析体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs FOXP3基因、IL-10基因和TGF-β基因的cDNA表达的变化。
　　结果:经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞和脐血CIK有明显的抑制作用,IL-7联合 IL-2诱导 CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs具有较自然分选的CD4+CD25+Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7浓度为4ng/ml,IL-2浓度为2000U/ml时诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs杀伤活性最强。
　　结论:成功建立了CD4+CD25+Tregs的体外培养体系,联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CD4+CD25-T细胞成为CD4+CD25+Tregs的优选方法,并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。

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第1章 前 言

1.1 调节性T细胞

1.2 调节性T细胞作用机制

1.3 调节性T细胞与自身免疫病的关系

1.4 调节性T细胞体外扩增方法

1.5 细胞因子对调节性T细胞增殖的影响

1.6 研究目的与意义

第2章 新生儿脐带血及成人外周血单个核细胞的制备

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第3章 新生儿脐带血CD4+CD25+Treg的分离、培养及鉴定

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论：

第4章 脐血CIK的分离、培养及鉴定

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

第5章 IL-7对脐带血CD4+CD25-T细胞的体外诱导培养

5.1 材料

5.2 主要应用的生物信息学软件

5.3 方法

5.4 结果

5.5 讨论：

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间取得的科研成果