抗肿瘤硫色满酮衍生物的可能作用靶点—微管蛋白和Toll样受体

摘要

微管是细胞骨架的主要组成成分,在维持细胞形态和细胞有丝分裂中起着至关重要的作用。尤其是在细胞的有丝分裂过程中,当细胞进入分裂期后,由微管解聚成的微管蛋白参与纺锤体的装配。任何干扰微管蛋白聚合和解聚功能活性的药物都会妨碍细胞周期,从而引起细胞的凋亡。因此以微管为作用靶点一直是抗癌药物研究的热点。
　　Toll样受体(TLR)是一类模式识别受体,通过多种信号传递改善免疫系统功能,活化 NF-κB信号通路,调节 TNF-α、ILs和IFN-α等多种细胞因子分泌。已证实几种TLRs的激动剂具有抗肿瘤作用,如imiquimod,resiquimod。
　　本文将通过两个途径对新型的硫色满酮类化合物的抗肿瘤作用靶点进行探讨,一方面以微管为作用靶点进行研究,另一方面以TLRs激动剂效应为出发点进行探讨。
　　首先从猪脑组织中纯化出微管蛋白,并采用 BCA法检测微管蛋白的初始浓度,然后用SDS-PAGE电泳法对其进行鉴定,再通过浊度法和电镜超微结构观察法两种方法综合评价提取的微管蛋白的聚合-解聚的功能活性,同时以典型的微管抑制剂紫杉醇和秋水仙碱作为阳性对照药物证明了提取出的微管蛋白的功能活性良好。本研究发现(z)-3-(氯代亚甲基)-6-甲基-硫色满-4-酮(CMMT)、(z)-3-(氯代亚甲基)-6-氟-硫色满-4-酮(CMFT)、(z)-3-(氯代亚甲基)-6-氯-硫色满-4-酮(CMCT)、(z)-3-(溴代亚甲基)-6-氟-硫色满-4-酮(BMFT)和(z)-3-(氯代亚甲基)-6-甲氧基-硫色满-4-酮(CMMOT)都能够抑制微管蛋白的聚合。探讨此类化合物是否具有TLRs激动剂作用的实验证实CMFT具有类LPS作用,可激活小鼠腹腔巨噬细胞,提高分泌TNF-α、IL-6和IL-12水平,提示其可能是TLRs的激动剂。
　　本研究表明,类似化学结构的CMMT、CMFT、CMCT、BMFT和CMMOT有着同秋水仙碱相似的作用都能够抑制微管蛋白的聚合;CMFT可能是TLRs的激动剂,具有类LPS作用,能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α、IL-6和IL-12水平。本研究结果表明新型硫色满酮抗肿瘤化合物的可能作用靶点是微管蛋白和TLRs,进一步通过各种实验确认这一结果,对研究探讨硫色满酮类化合物的抗肿瘤作用机制具有重要意义。

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第1章 绪 论

1.1 肿瘤靶向治疗及其药物

1.1.1 肿瘤的靶向治疗

1.1.2 微管作为抗肿瘤药物的靶点

1.1.3 硫色满酮类衍生物的研究背景

1.2 TLRs激动剂的研究

1.2.1 Toll样受体及其激动剂

1.2.3 细胞因子

第2章 硫色满酮类衍生物抑制微管蛋白聚合成微管

2.1 引言

2.2 材料和方法

2.2.1 材料

2.2.2 药品与试剂

2.2.3 主要仪器

2.2.4 供试药物和试剂的配制

2.2.5 一种硫色满酮类衍生物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

2.2.6 以微管蛋白为硫色满酮类衍生物抗肿瘤作用的靶点的研究

2.3 结果

2.3.1 流式细胞仪检测CMMT诱导的细胞凋亡

2.3.2 CMMT对Hela细胞周期的影响

2.3.3 微管蛋白的鉴定及含量分析

2.3.4 微管蛋白的活性分析

2.3.5 浊度法分析阳性对照药物对微管蛋白活性的影响

2.3.6 超微结构观察法分析阳性对照药物对微管蛋白活性的影响

2.3.7 供试药物对微管蛋白聚合的影响

2.4 讨论

第3章 硫色满酮类衍生物具有TLRs激动剂效应

3.1 引言

3.2 材料和方法

3.2.1 实验动物

3.2.2 药品与试剂

3.2.3 主要仪器与设备

3.2.4 供试药物的配制

3.2.5 小鼠腹腔巨噬细胞分离与培养

3.2.6 ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α含量的条件优化

3.2.7 ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α、IL-6和IL-12的含量

3.2.8 ELISA法检测小鼠血清中TNF-α含量

3.2.9 数据处理

3.3 结果

3.3.1 ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α含量的优化条件

3.3.2 ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α、IL-6和IL-12含量

3.3.3 ELISA法检测小鼠血清中TNF-α的含量

3.4 讨论

结论

参考文献

致谢