小鼠和贵州香猪胚胎玻璃化冷冻保存相关技术研究

摘要

为了解决我国动物遗传资源急速衰减及挽救濒危品种提供了新的思路和方法为胚胎冷冻提供研究方法。本实验对小鼠胚胎玻璃冷冻保存及相关技术进行了系统的研究，具体内容包括：荧光双色法检测冷冻前后小鼠胚胎活力；不同冷冻方法及冷冻保存时间对胚胎发育率的影响；冷冻后胚胎细胞损伤检测，并在其基础上对贵州地方猪种剑白香猪胚胎玻璃化冷冻技术进行初步了的探索。试验结果如下： 荧光物质FDA和PI能对不同活力胚胎进行标记，且在一定浓度范围内FDA对胚胎无毒副作用，PI对透明带完整的胚胎也无毒副作用。 胚胎冷冻效果好坏主要取决于玻璃化冷冻液，当玻璃化冷冻液对胚胎有很好的冷冻保护时，承载工具对胚胎冷冻效果影响不大，当玻璃化冷冻液对胚胎冷冻保护效果稍差时，承载工具的优越性才得以体现。但是，胚胎冷冻对小鼠桑葚胚的细胞膜的完整性、细胞内酯酶活性及线粒体分布功能均有影响，只是冷冻效果好的冷冻方法对细胞膜的完整性、细胞内酯酶活性及线粒体分布的影响小。同时以25％Gly+25％EG+50％mCZB为胚胎冷冻保护剂，采用细管法冷冻小鼠桑葚胚，在-196℃冷冻保存1天、10天、20天和30天解冻后对胚胎的发育率没有影响。基于上述研究本实验得出较为优化的小鼠桑葚胚冷冻方法是以玻璃化冷冻液(25％Gly+25％EG+50％mCZB)作为冷冻保护剂的细管法。 以10％EG+10％DMSO+0.6M(蔗糖)(基础液为M199)为玻璃化冷冻液，采用离心+CB处理胚内脂肪后冷冻和直接冷冻两种方法冷冻贵州剑白香猪4-细胞胚胎，解冻后胚胎存活率都很高，与鲜胚对照组差异不显著。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图版目录、图表目录、英文缩略词

声明

致谢

前言

第一章文献综述

1小鼠胚胎冷冻研究进展

2猪胚胎冷冻的研究进展

第二章FDA-PI荧光双色法快速评价小鼠桑葚胚活力

前 言

1材料

2方法

2结果

4分析与讨论

5结论

第三章不同冷冻保护剂及冷冻方法对小鼠桑葚胚发育率影响

前言

1材料

2方法

3结果

4分析与讨论

5结论

第四章小鼠桑葚胚冷冻后损伤检测实验

前言

1材料

2方法

3结果

4分析与讨论

5结论

第五章不同冷冻保存时间对胚胎冷冻效果的影响

前言

1材料：

2方法

3结果

4分析与讨论

5结论

第六章贵州剑白香猪4-细胞胚胎玻璃化冷冻保存技术研究

前言

1材料

2方法

3结果

4 分析与讨论

第七章结论

参考文献

附 录

实验用各溶液配方