大豆异黄酮提取纯化工艺及药理作用研究

摘要

大豆异黄酮(soybean isoflavones)简称为ISO，为多酚类的混合物。在植物体内以12种形式存在，包括染料木素、大豆苷元和黄豆苷元以及它们的β-葡萄糖苷形式存在，其中糖苷形式占绝大多数。众多学者对其化学成分、药理作用、临床应用做了研究，但对其黄酮类化合物的研究尚浅。本文以豆粕为材料对大豆异黄酮进行了研究，建立了大豆总异黄酮（total soybean isoflavones T-ISO）含量测定方法，确立了T-ISO的提取、分离、纯化以及酸水解总黄酮苷的工艺路线；并对异黄酮苷元检测方法和T-ISO降血脂以及抗氧化进行了探讨和研究，研究结果如下：
　　1．研究了紫外可见分光光度计对豆粕中大豆总异黄酮的检测法，大豆异黄酮特殊结构在紫外区有吸收峰可以检测提取总黄酮含量。
　　2．T-ISO提取的工艺路线为：提取溶剂为60％乙醇，提取温度为80℃，液料比为20:1，提取时间为2h，提取1次。提取率为0.59％。本实验工艺路线与文献记载工艺路线相比较，具有生产能耗低，工作程序少等优点，更适合于工业生产。
　　3．利用大孔树脂和有机溶剂萃取法对粗提物进行了纯化。以总异黄酮回收率为指标，优化了大豆总异黄酮的纯化工艺路线。纯化工艺为：选用D4006型大孔树脂，1BV(柱床体积)=40mL时，大豆总异黄酮上样液质量浓度为2mg/mL，速率为2mL/min，洗脱剂为80％乙醇，洗脱速率为2mL/min，洗脱剂用量为3BV，通过两次过柱大豆总异黄酮的回收率为56.22％，按此条件纯化后的大豆总异黄酮纯度达30.58％。
　　4．T-ISO酸水解的工艺路线为：甲醇浓度70％﹑温度65℃、提取时间3h和盐酸浓度为3mol/L。在此条件下，总黄酮苷元的得率为7.42％。
　　5．T-ISO有一定的降血脂的作用。各剂量组的小鼠血清中的TC、LDL-C、TG与模型组相比，都有一定程度的降低。
　　6．T-ISO对羟自由基的清楚效果比较明显，与抗坏血酸对比，大豆异黄酮精提物和抗坏血酸清除·OH自由基的EC50分别为0.101mg/mL，0.132mg/mL。其清除OH自由的能力明显强于抗坏血酸。

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第一章 前言

1.1 大豆异黄酮的研究现状

1.2 异黄酮类化合物提取及检测方法

1.3 大豆异黄酮药理作用和生理功能

1.4 本课题研究目的与意义

1.4 本文主要内容

第二章 大豆总异黄酮检测方法研究

2.1 试剂与仪器:

2.2 实验与方法

2.3 结果与分析

2.4本章小节

第三章 大豆总异黄酮提取纯化工艺研究

3.1 大豆总异黄酮的提取工艺研究

3.2 大豆总异黄酮的纯化工艺优化

3.3 本章小结

第三章 大豆异黄酮酸水解工艺条件的研究

4.1 大豆异黄酮酸水解工艺条件研究

4.2本章小结

第五章 大豆异黄酮药理实验研究

5.1 大豆异黄酮抗高血脂症作用研究

5.2 大豆异黄酮抗氧化作用研究

结论与展望

致谢

参考文献

附 录

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