紫苏叶提取物影响体外培养血管内皮细胞生长及功能的研究

摘要

目的：研究紫苏叶提取物对内皮细胞生长和功能的影响，为中药防治心脑血管疾病提供理论依据。
　　方法：采用水提醇沉、乙酸乙酯萃取法制备紫苏叶注射液。在鸡胚成纤维细胞体系中测定紫苏叶注射液的最大安全浓度。显微操作组织贴块法分离培养 SD大鼠腹主动脉血管内皮细胞，待细胞融合成单层后，进行传代培养，免疫细胞化学方法进行血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原（von Willebrand factor，vWF）鉴定。将不同浓度紫苏叶注射液与内皮细胞共培养，不加紫苏叶注射液培养组为对照组。采用MTT比色法检测紫苏叶注射液对内皮细胞增殖的影响；测定紫苏叶注射液与内皮细胞共培养后上清液中一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量观察紫苏叶注射液对内皮细胞功能的影响。
　　结果：实验结果如下。
　　①紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中的安全浓度为488.281μg/mL。
　　②显微操作组织贴块法能更有效地培养血管内皮细胞。血管植块培养72h后开始有内皮细胞从组织块周围移出，12d后开始融合成单层，对细胞进行vWF染色，细胞阳性率为97％。
　　③一定浓度范围内紫苏叶注射液对血管内皮细胞增殖有促进作用，且呈量效关系。6.25、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL（分别用I～Ⅷ组表示）紫苏叶注射液与内皮细胞共培养24h后，I～Ⅶ组细胞 OD值均大于对照组，该浓度范围内注射液能促进血管内皮细胞增殖（P<0.05），增殖率随给药物浓度的增加而增高，呈现量效关系。Ⅷ组细胞 OD值小于对照组，此时紫苏叶注射液对内皮细胞增殖呈抑制作用。
　　④一定浓度范围内浓度紫苏叶注射液能促进血管内皮细胞 NO的分泌量。与对照组相比，I～Ⅶ组均能显著提高 NO分泌量（P<0.05）。第Ⅶ组（400μg/mL浓度组）效果最明显，NO含量可提高到36.11±5.98μmol/L。第Ⅷ组NO的浓度小于对照组，该浓度紫苏叶注射液对内皮细胞的分泌功能呈抑制作用。
　　⑤不同浓度紫苏叶注射液对血管内皮细胞的SOD、MDA影响不同。I～Ⅶ组均能显著提高内皮细胞 SOD活力（P<0.05），减轻细胞的脂质过氧化程度。第Ⅶ组（400μg/mL浓度组）效果最明显，SOD浓度为34.49±1.56 U/mL，MDA浓度降低至31.91±58.65 nmol/mL。第Ⅷ组SOD的浓度小于对照组，MDA浓度大于对照组。
　　结论：紫苏叶注射液通过促进血管内皮细胞分泌 NO、提高细胞 SOD活力和减轻细胞脂质过氧化而促进血管内皮细胞生长。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

缩略语

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果

2.1 紫苏叶注射液在 CEF 体系中安全浓度的测定

2.2 大鼠血管内皮细胞的原代培养

2.3 紫苏叶注射液对血管内皮细胞生长的影响

2.4 紫苏叶注射液对血管内皮细胞功能的影响

3 讨论

3.1 紫苏叶注射液在 CEF 体系中安全浓度的测定

3.2 大鼠血管内皮细胞的分离培养与鉴定

3.3 紫苏叶注射液对内皮细胞生长的影响

3.4 紫苏叶注射液对内皮细胞分泌功能的影响

3.5 紫苏叶注射液对内皮细胞 SOD、MDA 的影响

4 结论

文献综述

参考文献

附 录

图 版

致谢

声明