兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究

摘要

本研究以0至150日龄兴义鸭为研究素材，利用RT-PCR结合A/T克隆的方法对肌细胞增强因子2家族（MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D）所有成员完整编码区（CDS）序列进行克隆，并对四个成员序列进行相关生物信息学分析，同时运用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）技术对兴义鸭该基因家族四个基因在不同生长阶段的心、肝、肺、肾、十二指肠、大脑、胸肌、腿肌、肌胃、腺胃10个组织的mRNA表达水平进行检测，试验主要研究成果如下：
　　（1）成功克隆获得了兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因编码区序列，全长分别为1479 bp、1221 bp、1104 bp（1308 bp）和1548 bp的开放阅读框序列，分别编码492、406、367（435）和515个氨基酸，同时发现兴义鸭MEF2C基因可能存在两种剪切方式。
　　（2）本研究首次克隆获得鸭MEF2B基因CDS区序列，该片段包含起始密码ATG和终止密码TAG，经序列比对与其他物种同源性较高。经NCBI在线预测mRNA保守结构域，结果显示其含有MADS-box保守结构域，不含HJURP_C区域，符合脊椎动物MEF2B结构特征。
　　（3）兴义鸭MEF2基因家族实时荧光定量PCR检测发现，该基因家族所有成员的mRNA在0、30、60、90、120和150日龄鸭的10个组织中均有不同程度的表达，经统计分析，各基因的相对表达量在不同组织、不同阶段以及不同性别之间均存在显著差异。
　　各基因在性别之间的表达差异都达到了显著水平，但同一生长阶段不同组织中公鸭和母鸭的表达趋势并不一致，同一组织不同生长阶段公鸭和母鸭的表达趋势并也不一致，这可能跟公母鸭的生长发育规律不同有关。各基因在同一生长阶段不同组织之间的表达差异都显著，同一组织不同生长阶段之间的表达差异也都达到显著水平，但各基因的表达趋势并不一致，表明四个基因的表达并不同步，这可能与四个基因各自的功能和表达顺序不同有关。