更年安汤对围绝经期大鼠自由基水平及卵巢颗粒细胞凋亡的影响

摘要

目的
　　观察更年安汤对围绝经期雌性大鼠的影响。本课题通过放免法测定模型大鼠血清雌二醇( E2)含量,比色法检测超氧化物歧化酶( SOD)与丙二醛( MDA)含量,免疫印迹法( Western blotting)检测各组大鼠卵巢颗粒细胞中 Bax 及 bcl-2 蛋白的阳性表达,以及光学显微镜观察卵巢组织形态学变化,从而探讨更年安汤对围绝经期雌性大鼠的治疗作用,以及雌激素含量与围绝经期氧自由基代谢和颗粒细胞凋亡的相关性。探讨该方通过改善围绝经期抗氧化作用及减少细胞凋亡从而达到延缓衰老,改善衰老卵巢功能的机制,为中医中药治疗围绝经期综合征提供相关的动物实验依据。
　　方法
　　12 月龄 SD 雌性大鼠 50 只,3 月龄 SD 雌性青年大鼠 10 只。按照自然老化初老动物模型要求,对 12 月龄雌性大鼠进行连续 10 天阴道细胞学涂片检查,选取动情周期不规则、动情间期延长者为围绝经期大鼠模型。将阴道涂片提示自然围绝经期造模成功的 40 只大鼠随机分为 4 组,分别为老年模型组(模型组)、己烯雌酚组(己烯组)、更年安汤高剂量组(安高组)、更年安汤低剂量组(安低组),另将 3 月龄 SD 雌性青年大鼠 10 只作为青年对照组(青年组)。青年组和模型组给予等体积生理盐水20ml·kg-1·d-1灌胃,己烯组给予 0.08mg·kg-1·d-1灌胃,更年安汤高、低剂量组分别给予生药量 47.2g·kg-1·d-1、23.6g·kg-1·d-1灌胃,每周称重 1 次,从造模成功第 1 日起开始给药,每日灌胃 2 次,连续 28 天。最后 1 次灌胃禁食 24h 后,立即断头处死各组大鼠取血,并剖取大鼠卵巢,放免法检测各组大鼠血清 E2 及比色法检测超氧化物歧化酶( SOD)与丙二醛( MDA)含量,免疫印迹法( Western blotting)检测各组大鼠卵巢颗粒细胞中 Bax 及 bcl-2 蛋白的阳性表达,以及光学显微镜观察卵巢组织形态学变化。
　　结果
　　1 更年安汤对围绝经期大鼠血清 E2 的影响：与模型组相比,青年组及三个治疗组大鼠血清 E2含量均较高( P<0.01)。
　　2 更年安汤对围绝经期大鼠血清 SOD 和 MDA 的影响：与青年组相比,模型组大鼠 SOD 活性明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01),与模型组相比,更年安汤高剂量组和己烯雌酚组活性明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01),更年安汤高、低剂量组与己烯雌酚组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；与青年组相比,模型组大鼠 MDA 含量明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与模型组相比,更年安汤高剂量组 MDA 含量明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与己烯雌酚组相比,更年安汤高剂量组 MDA 含量明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.05)；更年安汤低剂量组与己烯雌酚组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3 更年安汤对围绝经期大鼠卵巢 Bax蛋白和 bcl-2蛋白表达的影响：与模型组相比,青年组和三个治疗组卵巢 Bax蛋白表达均较低( P<0.05),更年安汤高低组与己烯组卵巢 Bax 蛋白表达虽均有降低,但仍高于青年组( P<0.05)；与模型组相比,青年组和三个治疗组卵巢 bcl-2 蛋白表达均较高( P<0.05),更年安汤高低组与己烯组卵巢 bcl-2 蛋白表达虽均有提高,但仍低于青年组( P<0.05)。
　　4 更年安汤对围绝经期雌性大鼠卵巢形态学的影响：青年组卵巢内可各级生长卵泡数量较多,颗粒层较厚,黄体数量较多；老年组大鼠卵巢内初级卵泡较少,卵泡总数较少,闭锁卵泡较多。
　　结论
　　更年安汤能够提高围绝经期大鼠血清 E2的水平和 SOD 活力,降低血清 MDA 含量,改善自由基代谢水平；同时通过抑制大鼠卵巢颗粒细胞凋亡以及改善卵巢形态结构的作用,从而达到延缓卵巢衰老的目的。提示了临床经验方更年安汤可能通过调节血清雌激素水平,减少自由基损伤途径发病,改善围绝经期大鼠抗氧化水平,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,从而延缓机体衰老。

目录

封面

声明

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 各实验组 SD 大鼠例数说明

2 更年安汤对围绝经期大鼠血清雌二醇（ E2）的影响

3 更年安汤对围绝经期雌性大鼠超氧化物歧化酶（ SOD）的影响

4 更年安汤对围绝经期雌性大鼠丙二醛（ MDA）的影响

5 更年安汤对围绝经期雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因 Bax 蛋白表达的影响

6 更年安汤对围绝经期雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因 bcl-2 蛋白表达的影响

7 围绝经期雌性大鼠卵巢组织形态学的变化

讨论

1 现代医学对围绝经期卵巢衰老相关因素的认识

2 围绝经期综合症动物模型的选择与评价

3 实验指标的选择与意义

4 阳性对照药物的选择

5 更年安汤组方方义分析

6 更年安汤对本实验指标的影响

结论

参考文献

致谢

附录 1 病理图片

附录 2 综述