补肾解毒通络方对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠MMP-9、TIMP-1的影响

摘要

目的： 观察补肾解毒通络方对 W istar 大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的临床症状表现、中枢神经组织 病 理 学 改 变 及 发 病 过 程 中 基 质 金 属 蛋 白 酶 -9 ( matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)的影响,探讨对中药对EAE大鼠的防治作用和机制,为中药治疗多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)提供实验依据。
　　方法：
　　(1)EAE模型建立：采用豚鼠脊髓匀浆法制作抗原,免疫诱导Wistar大鼠建立急性EAE模型,观察大鼠临床体征,记录每日体重和神经功能评分。
　　(2)实验动物分组及给药：设立补肾解毒通络方高、中、低剂量组预防性给药,同时设置激素组、空白组、EAE组及中药空白组。
　　(3)标本采集：分别于免疫后第15天(发病高峰期)和21天(恢复期)处死动物,采用心脏灌流法取脑、脊髓置于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋、切片。
　　(4)苏木素-伊红(HE)法染色观察脑、脊髓病理改变；SP (streptavidin-perosidase)法免疫组化染色观察脑、脊髓病理改变。
　　结果：(1)补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠的发病率与 EAE 组相比明显减低(P<0.01),高剂量组与激素组发病率无明显差异；补肾解毒通络方高、低组大鼠的平均潜伏期较 EAE 组明显延长(P<0.01),与激素组无显著差异(P>0.05)；补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠急性期、缓解期的神经功能评分明显低于 EAE 组,两组与激素组相比无显著差异；补肾解毒通络方高剂、中剂量组大鼠急性期、缓解期的体重明显高于 EAE 组、中药低剂量组,两组与激素相比无显著差异(P<0.05)。
　　(2)急性期补肾解毒通络方高、中、低剂量组大鼠CNS中炎性病灶数与EAE组相比显著减少(P<0.01),高剂量组与激素组相比无显著差异(P>0.05),中、低剂量组显著多于激素组(P<0.01)；缓解期补肾解毒通络方高、中剂量组大鼠 CNS 中炎性病灶数与 EAE 组相比显著减少(P<0.01),高、中剂量组与激素组相比无显著差异(P>0.05),低剂量组显著多于激素组(P<0.01)。
　　(3)急性期与EAE组相比,除中药低剂量组脊髓组织外、其余各组大鼠CNS中 MMP-9 的表达水平均有显明显降低,有显著性差异(P<0.05)；与激素组相比,中药中、低剂量组大鼠CNS中MMP-9的表达水平均有显明显升高,有显著性差异(P<0.05)；缓解期与EAE组相比,其余各组大鼠CNS中MMP-9的表达水平均有显明显降低,有显著性差异(P<0.05)；与激素组相比,中药高剂量组脊髓组织的MMP-9表达显著降低(P<0.05),中药中、低剂量组CNS中MMP-9表达较激素组显著升高,(P<0.05)。急性期与 EAE 组相比,其余各组大鼠 CNS中 TIMP-1 的表达水平均有显明显降低,有显著性差异(P<0.05)；与激素组相比,中药中、低剂量组大鼠CNS中TIMP-1的表达水平均有显明显升高,有显著性差异(P<0.05)；中药高剂量组大鼠CNS中TIMP-1的表达有显著降低(P<0.05)；缓解期与EAE组相比,其余各组大鼠CNS中TIMP-1的表达水平均有显明显降低,有显著性差异(P<0.05)；与激素组相比,中药中、低剂量组大鼠CNS中TIMP-1的表达水平均有显明显升高,有显著性差异(P<0.05)；中药高剂量组大鼠脊髓中TIMP-1的表达有显著降低(P<0.05)。
　　结论：(1)豚鼠脊髓匀浆法制备抗原,采用GPSCH+CFA+PBV联合免疫Wistar大鼠制备EAE动物模型,方法可靠,成功率较高。
　　(2)补肾解毒通络方可以明显降低急性EAE大鼠的发病率、缓解临床症状、缩短病程。
　　(3)补肾解毒通络方预防性治疗在急性期和缓解期均能明显减轻 EAE 大鼠CNS中炎性细胞浸润的程度、减少炎性病灶数,从而保护EAE大鼠神经功能。
　　(4)补肾解毒通络方可能通过下调 MMP-9、TINMP-1 的表达来预防和治疗EAE大鼠发病。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 资料分析以及统计学处理

结果

1 各组大鼠的临床表现观察

2 各组大鼠CNS的病理结果观察

3 各组大鼠急性期、缓解期CNS中MMP-9、TIMP-1表达

讨论

1 中医学对多发性硬化的认识

2 补肾解毒通络方药的立论依据

3 MMP-9/TIMP-1在多发性硬化发病过程中的意义

4 补肾解毒通络方对EAE大鼠的治疗作用

结论

参考文献

致谢

附录1 病理图片

附录2 文献综述