移植的人骨髓基质细胞在体内分布与安全性评价的实验研究

摘要

目的 在建立人骨髓基质细胞培养体系基础上，观察人骨髓基质细胞在裸鼠体内的分布情况和对脏器的影响，为人骨髓基质细胞作为干细胞移植的前期研究和安全性提供实验依据。 方法 采用密度梯度离心结合差速贴壁法分离培养人骨髓基质细胞，通过细胞形态学、表型特征对成人骨髓来源的基质细胞进行鉴定；采用细胞生长曲线分析和成骨诱导分化分析其体外增殖特性和分化潜能。而后建立人骨髓基质细胞静脉移植的裸鼠模型，观察受体裸鼠的一般情况，通过组织学分析、RT-PCR检测人Alu基因和CD45基因等技术手段，研究移植的骨髓基质细胞体内的分布情况和对脏器的影响。此外，还进行安全性检测，包括长期传代培养的观察和成瘤性实验检测。 结果 体外培养的人骨髓基质细胞为成纤维样细胞，细胞紧密排列呈漩涡状生长；流式细胞术检测CD34、CD45为阴性表达；细胞生长曲线提示第1至第5代人骨髓基质细胞增殖速度无显著性差异(P>0.05)；成骨诱导18天后，茜素红染色可见橙红色钙结节。在裸鼠移植模型中，输注第4代体外培养的人骨髓基质细胞后，受体裸鼠一般状况良好，解剖大体观、HE染色、瑞氏染色观察受体组织结构无异常。RT-PCR检测人Alu基因、CD45基因在不同移植时间相应脏器均有表达。此外，细胞长期传代后出现衰老征象，而无明显的成瘤特性。 结论 采用密度梯度离心结合差速贴壁法分离、DMEM-LG-10％FBS培养液可成功分离培养含有间充质干细胞的人骨髓基质细胞群。经静脉输注后，在不同移植时间检测，发现受体内各脏器均有分布，但进一步作安全检测发现移植的骨髓基质细胞尚无明显的恶变趋势和现象发生。

目录

论文说明：本文英文缩写词表

声明

第一部分 建立人骨髓基质细胞的体外培养体系

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分 移植的人骨髓基质细胞在体内分布及安全性研究

1材料与方法

2结果

3讨论

论文小结

参考文献

综述：干细胞标志及细胞示踪技术在干细胞移植中的应用

致谢