短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的生物化学、药理学和分子生物学的研究

摘要

目的:蛇毒是一种含有多种蛋白和多肽的混合物，其中不少毒性蛋白影响凝血功能(血液凝固、纤溶系统和血小板聚集)，这些毒素是蛋白质或酶。如L-氨基酸氧化酶、磷脂酶A、核苷酸酶、类凝血酶、纤溶酶、蛋白酶C：而有些是非酶蛋白，如解离素、Carinatin、Trigramin。它们的各种有效成分和性质也被广泛研究。然而，蛇毒中所含磷脂结合抗凝蛋白的研究尚未见报道。本课题的目的旨在从短尾蝮蛇毒中分离纯化出磷脂结合抗凝蛋白(Phospholipid-binding anticoagulation protein(PBAP)，并对它的一些生化、物理性质；对动物体内外的抗凝血、抗血栓、血液流变学作用；一般药理和毒理；作用机制以及基因克隆进行研究。从而通过生物学的方法得到电泳纯、有活性的磷脂结合抗凝蛋白，为制备安全、有效的新型溶栓制品打下良好的基础。 结论: 从短尾蝮蛇毒中分离纯化出的磷脂结合抗凝蛋白是二聚体，相对分子质量为24.0×1O<,3>(非还原)和14.6×10<,3>(还原)。等电点为pH 5.2。得率约占蛇毒总重量的0.421％。该蛋白具有精氨酸酯酶活性，能够与磷酯结合。能显著地延长活化部分凝血活酶时间和稀释的罗氏蝰蛇毒时间，减少组织凝血酶抑制试验(TTI)试剂的磷脂浓度，能加速其抗凝作用，它干扰Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子活性，可能通过内源性途径抑制凝血过程。它明显降低家兔全血粘度和红细胞压积。对家兔体外血栓；半体内血栓；肺动脉栓塞和大白鼠静脉血栓具有明显的抗栓作用。它不影响实验动物的神经系统、循环系统和呼吸系统，毒性低、无溶血、无出血活性。通过基因克隆和序列分析表明：它与已报道的一些蛇毒凝集素氨基酸序列相比较，有88％-99％的同源性。该蛋白具有潜在的临床应用价值。

目录

论文说明：主要缩略语

声明

前言

第一部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的分离、纯化、鉴定及理化性质研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附表

第二部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对凝血功能的影响

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第三部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白体内外对动物血栓的抗栓作用

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第四部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白对家兔流变学的影响

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附表

第五部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的一般药理作用

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附表

第六部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的急性毒性实验

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第七部分短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的基因克隆和序列分析

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

全文总结

创新、意义和前景

综述：天然抗凝血蛋白的研究进展

在学期间发表论文

致谢