广西眼镜蛇毒中降压因子的分离纯化及其药效学研究

摘要

目的：从广西眼镜蛇毒中分离纯化一种降压因子，并对其生物学活性、降血压作用、抑制心肌细胞肥大及细胞毒性作用进行研究。 方法：(1)采用Sephacryl S-100、Superose 12凝胶层析从广西眼镜蛇毒冻干粉中纯化出一种血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor，ACEI)，命名为降压因子(Hypotensive Factor，HF)。应用高效液相色谱(HPLC)及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度并测定分子量。以马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(HGG)为底物测定血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活力及精氨酸酯酶(AE)活力。用离体兔子十二指肠平滑肌测定HF增强缓激肽(Bradykinin，BK)的效应；(2)以小鼠急性毒性实验，测定LD<,50>。经颈动脉插管用BL-420生物信号分析系统分析HF和BK对正常大鼠及SHR血压的作用；(3)用形态学方法分析HF对肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响；采用MTT法检测HF对人肝癌细胞系(Be17404)及人胃癌细胞系(SGC7901)及正常乳鼠心肌成纤维细胞(Myocardial-Fibroblast,MF)的生长抑制情况。 结果：(1)纯化的蛇毒HF经SDS-PAGE还原和非还原电泳显示单一区带，测得分子量约为8.18KD；蛋白回收率为5.70％。经HPLC分析获得单一蛋白峰；HF为单条多肽链，由十二种氨基酸组成。实验显示HF对ACE有明显的抑制作用，同时有AE活性。HF能增强BK收缩离体兔子十二指肠平滑肌的效应；(2)小鼠急性毒性实验，LD<,50>=23.13mg/kg，95％的可信限为：20.98-25.66 mg/kg。实验证明，HF能增强BK对正常大鼠及SHR的降压幅度；在剂量为80μg/kg时，HF能增强BK引起的血压下降(P<0.05)；(3)HF能明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞肥大。HF对Be17404、SGC7901、MF均有细胞毒性作用并显示出良好的量效关系。 结论：HF可能属于ACEI类物质，具有明显的降血压作用。

目录

论文说明：缩略词

声明

摘要

第一部分广西眼镜蛇毒中降压因子的分离纯化、纯度鉴定及活性测定

前言

1材料和仪器

2实验步骤和方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第二部分广西眼镜蛇毒中降压因子的急性毒性及降压作用研究

前言

1材料和仪器

2实验步骤与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

第三部分广西眼镜蛇毒中降压因子对心肌细胞肥大的影响及对肿瘤细胞的毒性作用

前言

1材料和仪器

2实验步骤与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

结语

综述：蛇毒降压物质研究进展

Acknowledgements