复发/转移鼻咽癌患者化疗前后血浆EB病毒DNA水平检测的临床意义

摘要

背景与目的：近年来随着分子生物学的发展，提供了多项EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)相关的检测指标。EB病毒感染与鼻咽癌关系密切，近年来，有报道鼻咽癌患者血浆/血清中可检测到游离EBV-DNA，应用实时荧光定量PCR技术，在鼻咽癌患者外周血中可定量检测EBV-DNA水平。但血浆EBV-DNA水平检测在复发/转移性鼻咽癌患者化疗前后的临床意义尚少有研究报道。本研究定量检测鼻咽癌患者化疗前后血浆EBV-DNA水平，探讨其对于复发/转移鼻咽癌患者在疗效和预后方面的临床意义。
　　 方法：收集2008年5月～2010年2月在广西医科大学附属肿瘤医院化疗2科诊治、病理诊断明确的33例鼻咽癌患者的外周血66份，此33例患者均收集到自身对照的治疗前、后双份血样。另收集11例非鼻咽癌肿瘤患者血样作为对照。对33例临床复发/转移鼻咽癌患者和11例非NPC肿瘤患者的血浆，用荧光定量PCR方法在DA7600型检测仪上定量检测血浆中EBV-DNA水平。
　　 结果：
　　 1.荧光定量PCR方法可检测鼻咽癌患者血浆EBV-DNA，复发/转移鼻咽癌患者化疗前后血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA。复发/转移鼻咽癌患者化疗前血浆EBV-DNA的检出率为81.8％(27/33)，中位浓度为4900copies/ml(四分位数：3075～54900copies/ml)。复发/转移鼻咽癌患者化疗后血浆中仍可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，化疗后血浆EBV-DNA的检出率为51.5％(17/33)，中位浓度为520copies/ml(四分位数：0～33695copies/ml)。在非NPC肿瘤组组患者中，仅9.1％(1/11)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为0copies/ml。NPC患者化疗前血浆EBV-DNA水平与化疗后及非NPC肿瘤患者血浆EBV-DNA水平差异有统计学意义(P均＜0.05)。NPC患者化疗前血浆EBV-DNA阳性检出率与化疗后及非NPC肿瘤患者EBV-DNA阳性检出率差异有统计学意义(P均＜0.01)。NPC患者化疗前血浆EBV-DNA水平及阳性率显著高于化疗后和非NPC肿瘤患者的血浆EBV-DNA水平及阳性率。NPC患者化疗后血浆EBV-DNA阳性检出率与非NPC肿瘤患者比较，差异也有显著意义(P=0.034)。
　　 2.化疗前临床获益组72.7％(16/22)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为3110copies/ml，化疗后临床获益组31.8％(7/22)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为0copies/ml，在临床获益组化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度水平的比较差异均有统计学意义(P各为0.007和0.009)。对临床获益组亚组分析显示：化疗前临床有效组70.6％(12/17)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为3090copies/ml，化疗后临床有效组23.5％(4/17)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为0copies/ml，在临床有效组化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度水平的比较差异均有统计学意义(P各为0.015和0.005)。
　　 对临床获益组亚组分析显示：化疗前病情稳定组80.0％(4/5)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为5260copies/ml，化疗后病情稳定组60.0％(3/5)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为2530copies/ml，在病情稳定组化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度水平的比较差异均无统计学意义(P各为1.000和0.345)。
　　 化疗前肿瘤进展组100.0％(11/11)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为37800copies/ml，化疗后肿瘤进展组90.9％(10/11)的患者血浆中可检测到较高拷贝数的EBV-DNA，中位浓度为60200copies/ml，在肿瘤进展组化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度水平的比较差异均无统计学意义(P均＞0.05)。
　　 3.对于33例复发/转移鼻咽癌患者Kaplan-Meier生存分析显示：化疗前后的血浆EBV-DNA阳性及阴性两组患者无进展生存期均值在化疗前为7.6个月及14.2个月，化疗后为6.0个月及11.9个月。
　　 复发/转移NPC患者无论在化疗前或化疗后血浆EBV-DNA表达阳性和阴性两组患者的生存时间差异均有统计学意义(P各为0.044和0.002)。
　　 生存分析结果显示复发/转移NPC患者无论在化疗前或化疗后血浆EBV-DNA表达阴性患者的生存时间高于血浆EBV-DNA表达阳性患者的生存时间。
　　 结论：复发/转移性鼻咽癌患者化疗前后血浆EB病毒DNA水平变化可能对鼻咽癌疗效、预后方面是一个很有价值的观测指标，值得进一步研究。
　　 1.血浆EB病毒游离DNA水平变化可用于监测复发/转移性鼻咽癌患者的治疗效果。且多数治疗有效患者在化疗后血浆EBV-DNA水平下降至低于检测水平。
　　 2.复发/转移鼻咽癌患者化疗前后的血浆EBV-DNA水平可能是影响患者预后的因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:主要英文缩写及中英文对照表

声明

前言

材料与方法

1实验材料

1.1标本

1.2临床资料

1.3主要试剂

1.4主要仪器

2.实验方法

2.1FQ-PCR工作原理

2.2引物和探针的设计、合成及PCR反应体系的组成

3实验步骤

3.1患者血浆的分离

3.2血浆EBV-DNA的提取

3.3阴性质控品处理

3.4EBV临界阳性质控品处理、EBV强阳性质控品处理:同标本处理;EBV阳性定量参考品处理：8000rpm/min离心数秒，备用。

3.5FQ-PCR检测血浆中EBV-DNA的扩增程序

3.6结果的换算

3.7结果判定及质量控制

4化疗疗效及预后评价标准

5统计学方法

结果

1 FQ-PCR定量标准曲线的建立

2 血浆游离EBV-DNA阳性率及浓度水平

3 疗效和化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度变化

4 EBV-DNA浓度与生存的关系

讨论

1 关于EBV-DNA检测

2 血浆游离EBV-DNA阳性率及浓度水平

3 疗效和化疗前后EBV-DNA阳性率及浓度变化

4 EBV-DNA浓度与生存的关系

研究结论

参考文献

综述:鼻炎癌患者外周血Epstein-Barr病毒DNA水平检测临床意义及研究进展*

致谢