多种移植瘤中癌干细胞相关标志表达及血管内皮细胞来源的实验研究

摘要

目的：以体内移植瘤模型与体外条件诱导培养体系为基础，初步探讨癌干细胞与肿瘤血管内皮细胞生成的关系，其中着重明晰移植瘤血管生成方式与血管内皮细胞的来源，并进一步观察癌细胞系中癌干细胞向血管内皮细胞分化潜能的特性。 方法：采用裸鼠腋窝皮下注射癌细胞的方法建立3种移植瘤模型，2周后移植瘤直径达1cm上时，取移植瘤组织进行常规病理检测移植瘤的组织结构，及检测ki-67在移植瘤组织内细胞表达和分析肿瘤细胞的增殖情况；然后使用免疫组织化学方法分别检测单克隆抗人和单克隆抗鼠内皮细胞标志物(CD31、CD34和CD105)在移植瘤内新生血管的表达情况，以确定移植瘤内新生血管内皮细胞的来源；再进一步用免疫组织化学的方法检测鳞癌干细胞相关标志物(CD133、CD44、ESA和E-Cadherin)和肝癌干细胞标志物(CD133、CD44、c-kit和CK19)的表达情况；最后将TCA8113细胞在内皮细胞专用培养基中诱导分化，并且检测第3代和第5代细胞表达内皮细胞标志物(CD31、CD34和CD105)的情况。 结果：建立的3种皮下移植瘤，HE染色常规病理证实这些移植瘤具有类似人原发性癌的形态学特征，且皮下种植瘤体易分离便于观察、测量和活体检查。这些移植瘤内肿瘤细胞的ki-67呈强表达，与其增殖性和成瘤性强有一定的关系。移植瘤内新生血管内皮细胞抗鼠CD31、抗鼠CD34和抗鼠CD105免疫组化结果是阳性，而抗人CD31、抗人CD34和抗人CD105阴性，其中以抗鼠CD34染色的微血管密度值最高。鳞癌干细胞相关标志物(CD133、CD44、ESA和E-Cadherin)和肝癌干细胞标志物(CD133、CD44、c-kit和CK19)的表达在各自的移植瘤中都呈阳性表达，其中TCA8113移植瘤和TCA8113-M1移植瘤中CD133和E-Cadherin蛋白相对阳性表达更加强，BEL-7404移植瘤中CD133和c-kit的阳性表达相对比较高。体外诱导分化培养的TCA8113细胞随传代时间而逐渐向长梭型变化，第3代和第5代细胞抗人CD31、抗人CD34和抗人CD105都呈阳性表达。 结论：①舌癌、肝癌细胞系裸鼠移植瘤中可有多种癌干细胞相关标志物的表达，但其血管内皮细胞的主要来源于裸鼠宿主，其血管主要生成方式可能为内皮依赖性血管。②在体外诱导条件培养基中，舌癌、肝癌细胞系中癌干细胞有向血管内皮细胞分化的潜能。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文英文缩写词表

声明

前言

一、材料与方法

三 结果

4讨论：

论文小结

参考文献：

附录：综述 肿瘤血管生成方式的研究进展

七、攻读学位期间发表的学术论文目录

致谢