建立耐苯巴比妥难治性癫痫大鼠模型的实验研究

摘要

目的：探索耐苯巴比妥钠(phenobarbital，PB)杏仁核点燃大鼠模型的建立。
　　 方法：选取Wistar大鼠85只，体重200至250g，以随机化原则随机留取5只作为正常对照组(A组)，其余80只用于建立癫痫大鼠模型。利用立体定位下在大鼠右侧杏仁核插入绝缘镍铬电极固定，青霉素抗感染5天，大鼠恢复7天后用电刺激大鼠杏仁核，刺激参数：频率16Hz,波宽1ms,串长10s，电流具有恒流、方波特性，刺激强度从20μA起始，每次递增20μA，刺激间隔时间为1min，同步描记脑电图，直至脑电图上出现棘波、尖波、棘尖波或尖慢波、棘慢波等，即后放电，此时电流强度即为点燃前后放电阈值(afterdischargethreshold，ADT)，确定ADT5min后，以500μA的电流强度反复刺激动物杏仁核，刺激间隔时间7min,直至出现RacineⅣ～Ⅴ级的癫痫大发作行为，即点燃，成功建立大鼠癫痫模型。点燃动物连续出现10次大发作后24小时，按照同样的方法测定点燃后ADT，在成功建立癫痫模型后，留取5只作为生理盐水对照组(C组)，余即苯巴比妥钠(PB)实验组(B组)，经腹腔注射PB(30mg/kg)，用药1小时后测定ADT，同步断尾取血用高效液相色谱法检测大鼠血药浓度，并观察药物副反应，每只动物每周给药1次，共重复3次，以C组的ADT变化为基准对B组的ADT变化进行观察，从而从B组中分出癫痫耐药组(D组)、有效组(E组)和变化组(F组)。在大鼠耐药筛选后第1周末取D，E，A、C组大鼠断头取脑，用免疫组化测定脑组织中的P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)表达，将得到的大鼠用药前后的ADT及脑组织PGP结果采用两样本均数-t检验，并探讨难治性癫痫模型的建立，评价其可靠性。
　　 结果：
　　 1.80只Wistar大鼠中，42只大鼠成功点燃，点燃成功率52.5％，25只癫痫大鼠经过3次药物筛选，得到耐药鼠8只，耐药率21.62％；有效鼠10只，有效率27.02％；变化组7只，变化率为18.92％，成功建立难治性癫痫模型。
　　 2.大鼠在点燃过程中逐渐出现RacineⅠ-Ⅴ级行为。
　　 3.点燃成功大鼠出现高波幅棘慢波或棘尖波发放，有自发痫性放电。
　　 4.耐药组大鼠运用PB前、后，ADT无显著性变化(P＞0.05)；有效组鼠运用PB前、后，ADT有显著性变化(P＜0.05)。
　　 5.实验大鼠脑组织内有PGP表达，耐药组和有效组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)，耐药组鼠大脑广泛脑区的PGP表达较药物有效组显著增高。
　　 结论：
　　 1.电刺激大鼠杏仁核建立癫痫模型成功率高、重复性好。
　　 2.ADT为判断耐药敏感的指标。
　　 3.用PB对点燃大鼠进行筛选以制备耐PB难治性癫痫模型是进行耐药机制研究的理想模型。

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讨论

结论

参考文献

附图

综述　难治性癫痫多药转运体与动物模型的研究

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