肝癌细胞的激光镊子拉曼光谱研究

摘要

目的：研究正常肝细胞(L02)、肝癌细胞(HepG2)以及手术后新鲜的肝癌组织、癌旁组织(距手术切缘2cm以内)、正常肝组织(距手术切缘2cm以外，并且切缘找不到癌细胞)的拉曼光谱与分子生物学之间的关系以期建立肝癌细胞的特征拉曼光谱库。
　　 方法：
　　 1、取人工培养的对数生长期的正常肝细胞(L02)、肝癌细胞(HepG2)各5代，对其进行扫描打谱；
　　 2、取确诊的肝癌病人手术后的新鲜标本(正常、癌旁、癌组织)，用机械分散法制备单细胞悬液，进行单细胞悬液的拉曼光谱测定；
　　 3、将上述单细胞悬液离心15分钟，取上清液以同样的激发功率和曝光时间采集背景光谱；
　　 4、用单细胞悬液的拉曼光谱减去背景的光谱，最终得到单细胞的拉曼光谱；
　　 5、所得数据用origin6.0和TheUnscrambler软件进行数据处理和PCA分析。
　　 结果：
　　 1、培养的L02和HepG2之间的平均拉曼光谱，HepG2各代之间的拉曼光谱在624cm-1、853cm-1、938cm-1、1005cm-1、1158cm-1、1177cm-1、1259cm-1、1654cm-1(蛋白质的代表谱带)，787cm-1、1094cm-1(核酸的代表谱带)，1309cm-1、1448cm-1(脂类的代表谱带)，596cm-1、740cm-1(碳水化合物的代表谱带)的谱带峰存在显著差异；PCA分析能准确将L02与HepG2，HepG2代间区分开；
　　 2、分析L02各代之间平均光谱，在上述各谱带无显著差异；
　　 3、癌、癌旁、正常组织的单细胞的平均光谱在621cm-1、853cm-1、938cm-1、1005cm-1、1158cm-1、1177cm-1、1259cm-1、1654cm-1(蛋白质的代表谱带)，787cm-1、1094cm-1(核酸的代表谱带)，718cm-1、1448cm-1(脂类的代表谱带)，596cm-1(碳水化合物的代表谱带)谱峰存在显著差异；PCA分析能将三种组织较准确区分开。
　　 结论：
　　 1、培养的HepG2和L02的特征谱峰为：①蛋白质分子的特征谱峰为624cm-1、853cm-1、938cm-1、1005cm-1、1158cm-1、1177cm-1、1259cm-1、1654cm-1；②核酸分子的特征谱峰为787cm-1、1094cm-1；③脂类分子的特征谱峰为1309cm-1、1448cm-1；④碳水化合物分子的特征谱峰为596cm-1、740cm-1；
　　 2、HepG2和L02的蛋白质、核酸、脂类、碳水化合物上述代表谱带都存在显著差异，拉曼光谱能准确区分HepG2和L02，并且HepG2在个体差异上比L02的要大，其内部物质均匀性比正常细胞的要差；
　　 3、HepG2各代之间(除5代与1、3代之间)的蛋白质、核酸、脂类、碳水化合物的上述代表谱带也存在差异，拉曼光谱能准确区分各代HepG2，HepG2在生长过程中，细胞内的四大物质无论在空间和数量上可能处于很不稳定的状态；
　　 4、L02各代之间的蛋白质、核酸、脂类、碳水化合物的上述代表谱带未见明显差异；
　　 5、组织标本的单细胞的特征谱峰为：①蛋白质分子的特征谱峰为621cm-1、853cm-1、938cm-1、1005cm-1、1158crm-1、1177cm-1、1259cm-1、1654cm-1；②核酸分子的特征谱峰为787cm-1、1094cm-1；③脂类分子的特征谱峰为718cm-1、1448cm-1；④碳水化合物分子的特征谱峰为596cm-1；
　　 6、肝癌、癌旁、正常组织的单细胞之间的蛋白质、核酸、脂类、碳水化合物的上述代表谱带存在显著差异，拉曼光谱能较准确将肝癌、癌旁、正常组织的单细胞区分开，表明肝脏在癌变的过程中，上述四大物质发生了空间结构及数量上的改变，细胞内部物质的均匀性被破坏。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英汉缩略对照表

声明

前言

第一部分：培养的单细胞的拉曼光谱研究

1 研究对象

2 主要试剂与仪器设备

3 操作步骤

4 结果分析

5 结论

第二部分：组织标本单细胞悬液的拉曼光谱研究

1 研究对象与标本来源

2 样本处理

3 结果讨论

4 结论

第三部分：讨论与展望

讨论

展望

参考文献

综述 激光镊子拉曼光谱在恶性肿瘤诊断中的研究进展

致谢