环磷酰胺富集肾上腺皮质癌干细胞及癌干细胞标志物表达的研究

摘要

目的:
　　1、基于癌干细胞的耐药性，通过CTX体内干预连续传代的方法富集肾上腺皮质癌干细胞并评估其效率，为寻找肾上腺皮质癌干细胞提供更多选择的途径。
　　2、探讨肾上腺皮质癌干细胞相关标志物在CTX富集获得的各代细胞中的表达水平，以寻找肾上腺皮质癌干细胞的特异性表面标志物，为今后分离癌干细胞提供实验基础。
　　方法:
　　1、将人肾上腺皮质癌SW-13细胞株种植于裸鼠皮下，形成的异种移植瘤在裸鼠体内连续传代，同时给予化疗药CTX富集肾上腺皮质癌干细胞。
　　2、评估CTX富集癌干细胞的效率:运用悬浮球实验检测所富集到的细胞的自我更新能力，单细胞及平板克隆形成实验检测其克隆形成能力，MTT法检测其增殖的能力。
　　3、流式细胞法分析所富集到的三代细胞癌干细胞相关标志物CD133、ABCG2和CXCR4的表达水平。
　　结果:
　　1、CTX富集得到的三代细胞及对照组细胞的单细胞克隆形成率分别为(58.67±2.31)％、（75.00±3.61)％、(79.00±2.00)％和(43.33±3.06)％,平板克隆形成率分别为(349.67±12.99)‰、(449.33±42.70)‰、（618.67±24.58）‰和(196.33±24.46)‰，悬浮球形成率分别为（1.52±0.29）％、（4.17±0.41）％、（5.41±0.90）％和（0.37±0.11）％，经CTX富集的三代细胞在单细胞克隆形成率、平板克隆形成率、悬浮球形成率等均高于对照组（P＜0.05）;细胞生长曲线提示，经CTX富集的三代细胞增殖能力强于对照组细胞（P＜0.05）。
　　2、在CTX富集获得的三代细胞与对照组细胞中，CD133为阴性表达;ABCG2的表达率分别为(98.03±1.35)％、（92.86±5.33）％、(89.40±5.27)％和（87.09±12.34）％，组间两两比较(P＞0.05);CXCR4的表达率分别为（22.77±1.11）％、(40.93±2.33)％、（87.41±3.78）％和（27.85±12.71）％，第三代细胞CXCR4的表达率高于对照组（P＜0.05）。
　　结论:
　　1、CTX干预后连续传代法可以提高癌干细胞在肾上腺皮质癌中的比例。
　　2、CXCR4在第三代细胞中高表达，其可作为肾上腺皮质癌干细胞分选的候选指标。

目录

声明

略缩词及英汉对照表

摘要

前言

第一部分 CTX体内干预后连续传代富集肾上腺皮质癌干细胞并评估其富集效率

实验材料

实验方法

实验结果

第二部分 流式细胞法检测癌干细胞标志物CD133、ABCG2和CXCR4的表达

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述 癌干细胞富集和鉴定方法的研究进展

致谢

攻读硕士研究生期间完成的论文及参与的科研工作