亚低温对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织TLR2/MyD88信号转导通路的影响

摘要

目的:本研究旨在研究亚低温(32-34℃)治疗对经气道滴入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导形成急性肺损伤(acute lung injury，ALI)大鼠Toll样受体2/髓样分化因子88(TLR2/MyD88)通路中炎性介质及炎性因子变化的影响。包括相关炎性蛋白纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、TLR2、MyD88及核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的变化。
　　方法:90只雄性SD大鼠按随机数字表法被分成四组:对照组、非控温组、控温组及亚低温组。对照组样本数为18，其余各组均为24。将大鼠分离出左劲总动脉后置入留置针以备用，第一次抽取动脉血行血气分析，分离气管后对照组滴入生理盐水，0.5 mL/kg;非控温组、控温组及亚低温组各滴入等量的LPS。气道滴入后行呼吸机辅助通气，1h后第二次抽取动脉血行血气分析并对亚低温组及控温组实施目标性物理降温，分别控制肛温为亚低温组32～34℃、控温组36～37℃，对照组及非控温组不加以干预。分别于温度干预后1h，6h，12h分批处死大鼠，处死前第三次抽取动脉血行血气分析。取右肺以生理盐水灌洗收集肺泡灌洗液，后将右肺保存于10％福尔马林中，并于后期进行石蜡切片，光镜观察肺组织，进行病理改变半定量评分。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液中PAI-1蛋白表达;将左肺保存于-80℃冰箱，并于后期提取肺组织内总RNA及总蛋白，进行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TLR2mRNA、MyD88 mRNA表达，蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测NF-κ B p65蛋白表达。
　　结果:1、动脉血气分析:滴入LPS前，各组氧和指数无明显差别;滴入LPS后1小时，对照组氧和指数较滴入前无明显变化，急性肺损伤模型组较滴入前及对比同时段对照组明显下降，提示急性肺损伤模型成功建立;干预后，同时段亚低温组较非控温组及控温组氧和指数改善，具有统计学差异（1h:402.49±38.61比316.15±19.94比324.36±28.93;6h:349.72±98.20比263.22±57.10比284.30±13.68;12h:241.20±15.29比220.25±6.29比233.40±28.64）。2、病理损伤情况:非控温组、控温组及亚低温组光镜下观察见明显病理损伤变化，且较对照组病理半定量评分显著下降，为急性肺损伤模型建立成功的金标准;同时段亚低温组较非控温组及控温组评分下降，具有统计学差异（1h:6.04±0.74比8.17±0.59比7.96±0.65;6h:9.09±0.80比13.00±0.98比13.13±1.02;12h:10.79±1.42比13.38±1.08比13.42±0.68）。3、肺泡灌洗液中PAI-1表达:PAI-1蛋白表达(ng/L)于干预后1、6、12h明显下降（1 h:121.36±4.62比196.64±16.03比197.74±9.42,6 h:230.53±10.76比300.41±9.75比294.06±16.60,12 h:270.48±13.20比328.41±15.12比319.40±10.24,均P＜0.01）;4、肺组织中TLR2 mRNA、MyD88 mRNA表达（2-△△Ct）:较非控温组及控温组，亚低温组TLR2、MyD88的mRNA表达于干预后1、6和12 h明显下降（TLR2 mRNA表达1h:2.18±0.26比3.07±0.42比3.04±0.39,6h:4.09±0.29比5、06±0.39比4.90±0.25,12h:6.02±0.43比7.26±0.49比7.10±0.54; MyD88 mRNA表达1h:2.25±0.41比3.14±0.35比3.04±0.30,6h:5.67±0.55比7.20±0.55比7.01±0.76,12h:7.14±0.60比9.17±0.73比8.87±0.54，均P＜0.01)。5、肺组织中NF-κ B p65蛋白变化:较非控温组及控温组，亚低温组NF-κ B p65蛋白表达（A值）于干预后6h、12 h明显下降（6h:0.31±0.08比0.60±0.12比0.53±0.12,12h:1.05±0.17比1.73±0.13比1.76±0.35,均P＜0.01）。控温组及非控温组见无明显差异。
　　结论:亚低温可以有效降低急性肺损伤大鼠中TLR2/MyD88通路中TLR2mRNA、MyD88mRNA、NF-κB p65及相关炎性蛋白PAI-1的表达。早期(6小时)内运用亚低温有显著的肺保护作用，较晚阶段(6-12)小时可能获益。

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个人简历

摘要

前言

建模、标本采集

1、材料

2、方法

标本检测

1、材料

2、方法

3、处理数据

结果

讨论

结论

参考文献

附录

综述 亚低温的治疗进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文