针灸对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠肝脏组织中还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量影响的研究

摘要

目的：近年来，恶性肿瘤的发病率逐年上升，严重威胁着人类的健康甚至生命，目前化疗在治疗恶性肿瘤方面起着重要的作用。然而，化疗药物缺乏杀伤肿瘤细胞的特异性选择作用，而且还损伤人体的正常细胞以及破坏人体某些正常功能。临床上肿瘤病人接受化疗后会直接引起部分患者肝功能损害，继之可发生肝细胞坏死、胆汁瘀积、肝硬化等病理改变。这不仅影响了患者的生活及生存质量，甚至导致放弃化疗的患者错失治疗良机。大量科研结果表明针灸在治疗药物性肝损伤方面具有较好的疗效，但关于针灸对荷瘤小鼠化疗后肝脏组织中蛋白质含量异常的影响尚未见做深入研究。
　　本课题采用S180荷瘤小鼠，一次性腹腔注射环磷酰胺(CXT)，造成化疗药物性肝损伤的荷瘤小鼠模型，通过观察针灸后CXT化疗后荷瘤小鼠肝脏组织中还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量的影响，探讨针灸改善CXT化疗后荷瘤小鼠肝脏损伤的作用机理。
　　方法：选取健康7周龄，体重22±2g的雄性昆明种小鼠，建立S180肉瘤移植模型，将称量后的荷瘤小鼠，根据体重随机分为4组，分别是荷瘤空白组、荷瘤模型组、荷瘤针刺组及荷瘤艾灸组4组。将环磷酰胺(CXT)按照150mg/kg的剂量一次性为模型组、针刺组和艾灸组的S180荷瘤小鼠进行腹腔注射，空白组则注入同等剂量的0.9％生理盐水。根据药代动力学，4h后模型即成。造模成功后，荷瘤针刺组和荷瘤艾灸组分别取“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里”给予针刺和艾灸治疗。荷瘤空白组和荷瘤模型组陪同固定但不给予针刺和艾灸治疗，每天1次，持续5天。同时每天进行荷瘤小鼠割尾采血，检测荷瘤小鼠外周血白细胞的数量。治疗5天后处死荷瘤小鼠，取肝脏中1/3段大小的肝小叶一块,立刻置于4℃生理盐水中固定2小时，备用。用酶联免疫吸附试验（ELISA）观察肝脏组织中还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）蛋白质含量的阳性表达。采用SPSS19.0进行统计分析。
　　结果：
　　1.造模前与造模后各组荷瘤小鼠白细胞计数进行比较，荷瘤空白组造模前后没有差异(P＞0.05)，荷瘤模型组、荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组造模前后有显著性差异(P＜0.05)，说明环磷酰胺化疗所致荷瘤小鼠骨髓抑制、白细胞减少模型复制成功。
　　2.治疗5天后，荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组荷瘤小鼠外周血白细胞数量上升，荷瘤针刺组高于荷瘤空白组、荷瘤模型组，有显著差异(P﹤0.05)。荷瘤针刺组和荷瘤艾灸组相比无显著差异(P＞0.05)。但是荷瘤针刺组高于荷瘤艾灸组。
　　3.对GSH表达含量的影响。与荷瘤空白组相比，荷瘤模型组荷瘤小鼠肝脏组织中蛋白质GSH表达含量下降明显（P﹤0.001）；与荷瘤模型组比，荷瘤针刺组和荷瘤艾灸组荷瘤小鼠肝脏组织中GSH的含量升高（P﹤0.001）；与荷瘤针刺组比，在GSH表达含量的方面，荷瘤艾灸组明显升高，但两组无统计学意义(P＞0.05)。
　　4.对MDA表达含量的影响。与荷瘤空白组相比，在MDA表达含量方面，荷瘤模型组明显升高（P﹤0.001）；与荷瘤模型组相比，荷瘤针刺组和荷瘤艾灸组荷瘤小鼠肝脏组织中MDA含量降低(P﹤0.05)；与荷瘤针刺组比，荷瘤针刺组较荷瘤艾灸组降低明显，但两组差异不显著(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.造模前各组荷瘤小鼠外周血白细胞计数差别不明显，组间统计无差异，说明各组荷瘤小鼠的白细胞计数分布均衡，可用于实验。造模后除荷瘤空白组外，其他各组荷瘤小鼠白细胞计数均下降，造模前后相比有显著性差异，表明化疗药物环磷酰胺抑制骨髓，破坏造血微环境，杀伤外周血白细胞的毒副作用非常明显，环磷酰胺化疗所致荷瘤小鼠骨髓抑制、白细胞减少模型复制成功。
　　2.针灸可以提升外周血白细胞的数量。针灸减轻化疗后骨髓抑制，改善造血微环境，升高白细胞的疗效是确切的，且针刺组回升迅速，与前期导师组研究的结果相一致。
　　3.针刺和艾灸可以上调荷瘤小鼠肝脏组织中蛋白质GSH的表达水平，有助于清除化疗药物对肝脏所形成的低毒性物质，抑制脂质过氧化反应，从而减少DNA的损伤和突变，更容易让细胞进入保护和恢复肝脏功能的状态。实验结果显示，针灸可以升高荷瘤小鼠肝脏组织中GSH的表达，且针刺的疗效好于艾灸。
　　4.针刺和艾灸可以下调荷瘤小鼠肝脏组织中蛋白质MDA的表达水平，都能够调节肝脏免疫细胞及蛋白质含量的生成。在脂质过氧化反应过程中,通过氧化降低了反应性醛（由不饱和脂肪酸氧化分解时所释放出的物质）；在肝脏组织中，增强免疫细胞的功能，提高机体抗氧化和防御系统的能力，从而对环磷酰胺化疗药物性肝损伤有着增效减毒的作用。实验结果显示，针灸可以降低荷瘤小鼠肝脏组织中MDA的表达含量，且针刺的疗效好于艾灸。
　　总之，通过本实验研究结果表明，针刺和艾灸可以改善化疗后骨髓造血微环境，都能够提升外周血白细胞计数。同时，通过针刺和艾灸提升荷瘤小鼠肝脏组织中GSH的表达含量和降低荷瘤小鼠肝脏组织中MDA的表达含量，调节肝脏细胞、蛋白质含量的生成，让细胞起到保护和恢复肝脏功能的作用，增强在肝脏中免疫细胞的功能，提高机体抗氧化和防御系统的能力，抑制脂质过氧化反应，从而对化疗后产生的肝脏损害有着增效减毒的作用，是针灸对肿瘤化疗后机体肝脏功能起到良性调节作用的途径之一。

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前言

材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 实验方法

2.1动物分组及模型制作

2.2 S180荷瘤小鼠化疗模型制作

2.3取穴及治疗方法

2.4 取材方法

2.5 指标检测与分析方法

3 统计分析

结果

1 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠外周血白细胞计数的影响

2 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠肝脏组织中GSH表达含量的影响

3 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠肝脏组织中MDA表达含量的影响

理论探讨

1 中医学有关理论依据

1.1 祖国医学对肿瘤的认识

1.2 祖国医学对药物性肝损伤的认识

1.3 选穴依据

2 现代医学有关认识

2.1 GSH的生物学特性

2.2 MDA生物学特性

3 中医药及针灸治疗的研究进展

4 实验结果分析及作用机制探讨

4.1 针灸对CTX荷瘤小鼠外周血白细胞的影响

4.2 针灸对肝脏组织中GSH表达含量的影响

4.3 针灸对肝脏组织中MDA表达含量的影响

结论

致谢

参考文献

附录1 综述:针灸对化疗药物性肝损伤的研究进展

附录2 在校期间论文著作和科研情况