针灸对环磷酰胺(CTX)化疗荷瘤小鼠脾脏组织中白细胞介素-12(IL-12)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量影响的研究

摘要

目的：本课题以环磷酰胺（CTX）抑制荷瘤小鼠免疫功能为切入点，通过观察针灸对CTX化疗S180荷瘤小鼠脾脏指数以及对脾脏组织中白介素-12（IL-12）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响，揭示针灸改善S180荷瘤小鼠化疗所致免疫功能损伤的分子生物学机制。
　　方法：在无菌操作台中，取S180肉瘤种鼠腹水，经生理盐水3倍稀释，取0.3ml细胞稀释液接种于消毒后的正常小鼠下腹腹腔，每7天传代1次。在无菌操作台中抽取生长良好的S180荷瘤小鼠腹水，用生理盐水配制成5×106个/ml的细胞悬液，将体重22±2g的健康7周龄雄性昆明小鼠按0.2ml/只的计量接种于常规皮肤消毒后的正常小鼠左前肢腋部皮下。观察5天，至左腋下可触及5～6mm大小肉瘤为植瘤成功。按照荷瘤小鼠体重随机分为荷瘤空白组、荷瘤模型组、荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组。荷瘤空白组注射同等剂量的生理盐水，其余3组按150mg/kg/d腹腔注射CTX溶液，依据药代动力学注射4h后造模成功。在模型建立成功后同一时间段，荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组分别取“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里”予以针刺、艾灸治疗，荷瘤空白组、荷瘤模型组陪同固定，每天在相同时间段进行治疗。治疗3天、5天后的第2天分别处死一批小鼠，取出完整脾脏，称重后匀浆。用ELISA检测法检测脾脏组织中IL-12和TNF-α含量。数据采用SPSS19.0 for Windows统计分析软件对数据进行分析。
　　结果：1、治疗3天后，除荷瘤空白组外，荷瘤模型组、荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组脾脏指数均降低，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组脾脏指数高于荷瘤模型组，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤艾灸组脾脏指数虽高于荷瘤针刺组，但无显著性差异（P>0.05）；治疗5天后，荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组化疗荷瘤小鼠脾脏指数高于荷瘤模型组，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组脾脏指数虽高于荷瘤艾灸组，但无显著性差异（P>0.05）。
　　2、治疗3天后，除荷瘤空白组外，荷瘤模型组、荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12含量均降低，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12含量高于荷瘤模型组，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组脾脏组织中IL-12含量高于荷瘤艾灸组，但无显著性差异（P>0.05）；治疗5天后，荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12含量均高于荷瘤模型组，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组的脾脏组织中IL-12含量虽高于荷瘤艾灸组，但无显著性差异（P>0.05）。
　　3、治疗3天后，除荷瘤空白组外，荷瘤模型组、荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组小鼠脾脏组织中TNF-α含量均降低，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组化疗荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α含量高于荷瘤模型组，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤艾灸组的脾脏组织中TNF-α含量虽高于荷瘤针刺组，但无显著性差异（P>0.05）；治疗5天后，除荷瘤空白组外，其余各组化疗荷瘤小鼠脾脏组织TNF-α含量均上升，尤以荷瘤针刺组、荷瘤艾灸组脾脏组织中TNF-α含量上升较为明显，有显著性差异（P＜0.05），荷瘤针刺组的脾脏组织中TNF-α含量虽高于荷瘤艾灸组，但无显著性差异（P>0.05）。
　　结论：1、针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏损伤可起到保护和修复作用。结果显示，CTX化疗可降低荷瘤小鼠脾脏指数。而针刺和艾灸可以提高化疗荷瘤小鼠的脾脏指数，能够改善因CTX化疗后引起的免疫功能损伤。治疗3天荷瘤艾灸组优于荷瘤针刺组，治疗5天荷瘤针刺组优于荷瘤艾灸组。
　　2、针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12的含量有一定的影响。CTX化疗引起荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12的含量的下降。而针刺和艾灸均可以提高化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12的含量。治疗3、5天荷瘤针刺组均优于荷瘤艾灸组。
　　3、针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α的含量有一定的影响。CTX化疗引起荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α的含量的下降。而针刺和艾灸均可以提高化疗荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α含量。治疗3天荷瘤艾灸组优于荷瘤针刺组，治疗5天荷瘤针刺组优于荷瘤艾灸组，针刺比艾灸提高化疗荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α含量更明显。
　　实验结果表明，针灸可以提高CTX化疗荷瘤小鼠脾脏指数及脾脏组织中IL-12和TNF-α的含量，从而减轻化疗所致的免疫功能损伤。结合导师组前期的研究成果，证实针灸不仅可以改善化疗引起的骨髓抑制，促进造血干细胞的分裂增殖，提升白细胞，增强机体的免疫功能，而且还能通过对化疗所致免疫器官脾脏损伤的修复以及对白细胞介素-12和肿瘤坏死因子α的良性调节，IL-12对肿瘤细胞引起免疫反应和抗血管生成作用，提高IL-12含量能够杀死肿瘤细胞，TNF-α能够引起肿瘤细胞出血而坏死，提高TNF-α含量也能够杀死肿瘤细胞，所以针灸能够增强机体的免疫能力，这对于增强患者抗肿瘤、抗感染能力，改善临床症状与体征有着重要意义。

目录

封面

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前言

实验材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计分析

结果

1 小鼠一般情况及主要症状观察

2 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏指数的影响

3 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏组织中IL-12含量的影响

4 针灸对CTX化疗荷瘤小鼠脾脏组织中TNF-α含量的影响

理论探讨

1 中医学对肿瘤、化疗毒副作用和免疫功能损伤的认识

2 选穴依据

3 现代医学有关研究

4 导师组前期的研究成果

5 实验结果分析及作用机制探讨

结论

致谢

参考文献

附录1 文献综述:防治化疗后免疫功能损伤的研究进展

附录2 在校期间论文著作和科研情况