EPCs在犬下颌骨非血管化输送盘牵张成骨血管新生中的作用的研究

摘要

目的:复制犬下颌骨非血管化输送盘牵张成骨的动物模型，并且通过体内试验，研究局部移植内皮祖细胞对非血管化游离输送盘牵张成骨血管新生的影响以及VEGF与bFGF在其中的作用。
　　方法:将12只健康杂种犬随机分为2组，每组6只，即为实验组（局部移植EPCs的非血管化游离输送盘）和对照组（非血管化游离输送盘），建立该动物模型，实验组为牵张结束固定期第2天，予牵张区域注射EPCs，对照组注射同体积生理盐水。分别于牵张结束后固定1周、2周后各处死动物3只。观察动物大体标本，通过×线片观察成骨情况，通过HE染色观察牵张区域组织新生、CD105的免疫组化观察两组的血管新生情况，通过免疫组化、免疫印迹(WB)、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达量。
　　结果:所有动物均完成牵张成骨手术，无死亡。术后伤口恢复良好，无流脓流液，无牵张器或钛钉松动脱落情况，无牵张器断裂情况。
　　大体观:固定1周及2周，对照组及实验组牵张区域均见新生软组织生长，未见成骨，新生软组织表面可见毛细血管。
　　X线片:固定1周、2周，实验组及对照组牵张区域均为低密度影，未见成骨高密度影，与骨断端及输送盘界限清楚。
　　HE染色:1周实验组及对照组镜下均为肉芽组织，无成骨，镜下见大量胶原纤维及毛细血管，可见间充质样细胞，实验组肉芽组织较成熟，胶原纤维稍粗大;2周实验组及对照组镜下均为肉芽组织，胶原纤维变粗大，血管减少，实验组肉芽组织更为成熟，胶原纤维粗大，血管密集且管壁增厚。
　　血管密度观察:CD105免疫组化结果显示，同一时期，实验组微血管密度均高于对照组(P＜0.05);纵向比较，微血管密度逐渐降低，也即1周＞2周(P＜0.05)。
　　VEGF表达:免疫组化、RT-PCR、WB结果均显示VEGF表达量逐渐下降(P＜0.05)，同时期实验组较对照组VEGF表达高(P＜0.05)。
　　bFGF表达:免疫组化、RT-PCR、WB结果均显示bFGF含量逐渐下降(P＜0.05)，同时期实验组较对照组VEGF表达多(P＜0.05)。
　　结论:本实验成功复制非血管化游离输送盘牵张成骨动物模型，证实内皮祖细胞可以促进牵张区组织血管新生，且VEGF及bFGF参与其中。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

材料及方法

1、实验仪器及试剂

2、实验方法

结果

1、一般情况

2、大体标本观察

3、X线片观察

4、HE染色组织观察

5、CD105免疫组化观察血管新生结果

6、免疫组化检测VEGF、bFGF表达

7、荧光定量PCR检测各组VEGF、bFGF表达

8、免疫印迹法检测VEGF、bFGF表达情况

讨论

1 非血管化游离输送盘牵张成骨组织学改变

2 内皮祖细胞(EPCs)移植对非血管化游离输送盘血管新生的影响

3 VEGF、bFGF对血管新生的影响

结论

参考文献

附录

综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文