IL-16基因多态性和肝纤四项与肝炎、肝硬化、肝癌的相关性研究

摘要

目的：研究白介素-16(IL-16)基因rs11556218G/T，rs4072111C/T和rs4778889C/T三个位点的基因多态性，比较肝炎、肝硬化、肝癌发生发展过程中IL-16基因型、等位基因分布频率。同时动态分析在肝炎、肝硬化和肝癌等病理状态下肝纤四项即血清Ⅳ型胶原（CIV）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原N端肽（PCⅢNP）（简称肝纤四项）的含量变化，希望通过此项群体研究，揭示广西人群中IL-16的基因多态性与乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相关性肝炎（chronic hepatitis B，CHB）、肝硬化（liver cirrhosis，LC）和肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发病风险的关系，寻找相关动态变化的血清学指标，为肝癌的发病机制研究提供科学依据。
　　方法：纳入研究对象共592例，其中病例组424例，包括CHB129例，HBV-LC129例，HBV-HCC166例；健康对照组168例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分别检测IL-16rs11556218、rs4072111和rs4778889三个位点的基因多态性，并利用DNA直接测序法进行测序验证。采用群体遗传学哈-温平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）定律检验各病例组和对照组纳入人群是否来自同一孟德尔群体，是否具有群体代表性。采用二元logistic回归分析校正年龄、性别、种族、吸烟、饮酒和体重指数（body mass index，BMI）等条件，计算OR值（odds ratio，OR）和95％可信区间（confidence interval，CI），分析IL-16基因多态性与CHB，HBV-LC和HBV-HCC的发病风险相关性。肝纤四项采用竞争抑制和夹心法原理检测,通过Mann-Whitney U法进行两两比较正常对照组与在肝炎、肝硬化和肝癌等病理状态下肝纤四项差异情况。
　　结果：⑴对照组、CHB组、HBV-LC组以及HBV-HCC组IL-16基因rs11556218、rs4072111和rs4778889位点的基因型分布频率均符合HWE定律（P值均大于0.05），说明数据来自同一孟德尔群体。⑵IL-16基因rs11556218位点有TT、TG和GG三种基因型。以野生型TT基因型作为参照，联合TG+GG基因型（显性模型）以及TG、GG基因型与CHB、HBV-LC和HBV-HCC的患病风险均无相关（P值均大于0.05）；发现G等位基因与T等位基因比增加CHB的患病风险（OR=1.51,95% CI=1.06-2.15，P=0.021），与HBV-LC和HBV-HCC的发病风险均无相关性（P值均大于0.05）。⑶IL-16基因rs4072111位点有CC、CT和TT三种基因型。以野生CC基因型与C等位基因为参照，未发现CT、TT基因型、T等位基因以及联合CT+TT基因型（显性模型）与CHB、HBV-LC、HBV-HCC的发病风险存在相关性（P值均大于0.05）。⑷IL-16基因rs4778889位点有TT、TC和CC三种基因型。以TT基因型作为参照，结果显示，TC基因型可降低HBV-HCC的发病风险至0.56倍,TC基因型与CHB和HBV-LC的发病风险无相关性（P值均大于0.05）；联合TC+CC基因型（显性模型）以及CC基因型与CHB、HBV-LC和HBV-HCC的患病风险无相关性（P值均大于0.05）。⑸对年龄、性别、吸烟和饮酒习惯进行分层分析发现，携带IL-16基因rs11556218位点TG与TG+GG基因的女性患HBV-HCC风险显著增加；携带IL-16基因rs4072111位点CT与CT+TT基因的男性、吸烟者和较年轻者（年龄＜50岁），显著降低HBV-HCC患病风险；携带IL-16基因rs4778889位点TC与TC+CC基因的男性，较年轻者（年龄＜50岁）患HBV-HCC风险显著降低。⑹对IL-16基因rs11556218、rs4778889和rs4072111三个SNPs单倍型进行分析，发现TCT单倍型降低CHB发病风险（OR=0.66，95%CI=0.47-0.94，P=0.022），GTT单倍型降低HBV-LC的发病风险（OR=0.38，95%CI=0.16-0.90，P=0.023），表示TCT单倍型对CHB是一个保护性因子，GTT单倍型对HBV-LC是一个保护性因子。GCT单倍型显著增加了CHB（OR=8.59，95%CI=3.56-20.75，P=0.001）和HBV-HCC（OR=2.59，95%CI=0.99-6.75，P=0.044）的发病风险。表示GCT单倍型对CHB和HBV-HCC是一个危险因子。⑺肝纤四项肝硬化组的CIV、HA和LN值高于其他各组，其次是在肝癌组CIV、HA和LN值高于肝炎组；肝炎组PIIINP值高于其他各组，肝癌组PIIINP值高于肝硬化组。
　　结论：①携带IL-16基因rs11556218位点G等位基因患CHB的风险增加至1.51倍，TG与TG+GG基因型的女性患HBV-HCC风险显著增加；携带IL-16基因rs4072111位点CT与CT+TT基因的男性、吸烟者和较年轻者（年龄＜50岁），患HBV-HCC风险显著降低；携带IL-16rs4778889位点TC基因型患肝癌的风险显著降低至0.56倍，TC与TC+CC基因的较年轻者（年龄＜50岁），男性患HBV-HCC风险显著降低。②TCT单倍型降低CHB发病风险，GTT单倍型降低HBV-LC的发病风险。GCT单倍型显著增加了CHB和HBV-HCC的发病风险。③C.HB,HBV-LC,HBV-HCC的CIV、PIIINP、HA和LN显著高于健康对照组。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1. 实验材料

2 主要试剂及仪器

3 实验方法

4.质量控制

5 统计学方法

结果

1． 各组基本资料

2. IL-16基因三个SNPs位点PCR扩增产物电泳结果

3 IL-16 基因三个SNPs位点酶切产物电泳结果

4 IL-16基因三个SNP位点扩增产物测序结果

5.哈-温平衡定律检验结果

6 IL-16基因三个位点基因分布与感染HBV相关疾病的相关性分析

7 IL-16基因多态性与HBV-HCC相关性的分层分析

8 IL-16基因rs11556218，rs4072111和rs4778889构建单倍型分析

讨论

1.IL-16的基因多态性与疾病相关性

2. IL-16基因多态性与肝癌的关系

3．IL-16基因多态性与HBV-HCC相关性的性别差异分析

4. IL-16基因多态性与肝癌相关性的年龄差异分析

5．IL-16基因多态性与HBV-HCC发病风险相关性的吸烟、饮酒习惯差异分析

6. IL-16基因rs11556218，rs4072111和rs4778889位点构建单倍型分析

7.肝纤四项与HBV相关性肝炎、肝硬化、肝癌发生发展过程中的差异分析

8.课题展望

结论

参考文献

附 录1中英文缩写索引

综述:白介素-16与相关疾病的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文