2型谷氨酰胺转氨酶过表达对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响及机制探讨

摘要

目的：探讨2型转谷氨酰胺酶（TG2）过表达对乳腺癌MCF-7细胞化疗耐药的影响及其相关机制。
　　方法：⑴以TG2慢病毒过表达载体构建转染细胞，设3组：TG2组即转染过表达TG2组、CON组即不转染空白组、NC组即转染阴性对照组。各组在培养基中培养。转染72h后，以嘌呤霉素1ug/ml持续筛选5天，荧光显微镜观察慢病毒的感染效率。荧光定量PCR检测各组的TG2的mRNA表达量，Western-blot技术检测各组中TG2蛋白的表达情况。⑵各组细胞都用阿霉素处理培养，用MTT法检测阿霉素对各组细胞处理后的半数致死率（IC50），细胞流式检测各组的凋亡情况。⑶进一步用Western-blot技术检测各组中凋亡相关蛋白BCL-2、capase-3，以及PAKT/AKT的表达情况。⑷用TG2抑制剂MDC处理TG2组后检测TG2、BCL-2、Capase-3，以及PAKT/AKT表达和IC50情况。
　　结果：①TG2组、CON组、NC组比较，TG2组的TG2转录mRNA和蛋白表达比CON组和NC组水平明显升高，有统计学意义（P＜0.05）。②MTT结果显示TG2组IC50为（40.7±3.56）ug/ml，与CON组（17.4±1.45）ug/ml和NC组（22.7±2.0）ug/ml比较差异有统计学（。FCM显示TG2组的凋亡率为（38.50±5.50）％，与CON组(87.4±12.5)%和NC(53.1±4.7)%组比较有统计学意义。③Western-blot结果显示，TG2组比CON组Capase-3的表达下降，而BCL-2、AKT/P-AKT表达上升（P＜0.05）。与NC组比较差异无统计学意义。④经过TG2抑制剂MDC处理TG2组的AKT表达降低差异有统计学意（P＜0.05），而BCL-2、Capase-3差异无统计学意义（P＞0.05），但随MDC浓度增加在一定范围内对阿霉素的IC50值下降有统计学意义。
　　结论：⑴乳腺癌MCF-7细胞中TG2的过表达会使其阿霉素耐药性增加，并且可以被其抑制剂抑制。⑵TG2增加乳腺癌耐药性可能是通过下调Capase-3的表达和上调BCL-2、AKT/PAKT分子发挥作用。

目录

封面

声明

个人简历

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1.实验材料

技术路线图

2.实验方法

实验结果

1.细胞转染的效率检测

2.Real-time PCR检测慢病毒感染后TG2 mRNA的表达

3.Western blotting检测慢病毒感染后TG2蛋白的表达

4.MTT法检测慢病毒感染后各组细胞对阿霉素的敏感性

5.Rh123罗丹明123检测各组细胞凋亡率

6.Western blottin技术检测各组细胞凋亡相关基因bcl-2、capase-3和AKT/PAKT蛋白的表达

7.MDC抑制剂对TG2组的阿霉素耐药性的影响

8.MDC对TG2组的影响WB结果如下

讨论

结论

参考文献

附录

综述: TG2和肿瘤的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文