γ-分泌酶抑制剂对耐雷帕霉素人成骨肉瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘要

目的：通过研究γ-分泌酶抑制剂(DAPT)、雷帕霉素（RAPA）对骨肉瘤细胞株增殖、侵袭及凋亡的影响,初步研究DAPT对骨肉瘤细胞耐药逆转可能性，探讨在骨肉瘤多药耐药机制中mTOR通路、Notch通路与相关影响因素的联系。
　　方法：体外建立培养耐RAPA骨肉瘤MG-63细胞株；噻唑蓝(MTT)比色法检测耐RAPA骨肉瘤MG-63细胞株的耐药指数，测定不同浓度的RAPA、DAPT对2种细胞株增殖影响;划痕试验测定2种细胞株的迁移能力；Transwell法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力，对比2种药物干预下各细胞株侵袭过程中迁移率的差异；Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪测定不同药物对2种细胞株凋亡的影响;Western blot法检测不同药物作用下各细胞株中p53蛋白的表达。
　　结果：MTT结果显示RAPA及DAPT均能抑制2种细胞株的增殖。Transwell结果表明2种细胞株在不同浓度药物作用下迁移率出现明显差异。流式检测凋亡发现RAPA、DAPT均能诱导2种细胞株细胞发生凋亡,骨肉瘤MG-63细胞早、晚期凋亡率均与药物干预剂量呈正比,而实验组耐雷帕霉素MG-63细胞与空白对照组细胞比较，仅在高剂量药物作用下,早、晚期凋亡率差异存在统计学意义。Western blot检测结果表明,在不同浓度RAPA、DAPT药物作用下,2种细胞株中p53表达量存在差异，骨肉瘤MG-63细胞p53表达量呈药物剂量依赖性,而耐雷帕霉素MG63细胞p53的表达量则未随药物浓度升高而明显增加。
　　结论：RAPA、DAPT均能有效抑制骨肉瘤MG-63细胞及耐雷帕霉素MG-63细胞的增殖、侵袭,并促进其发生凋亡，随着γ-分泌酶抑制剂浓度升高,耐雷帕霉素的骨肉瘤细胞株发生凋亡的程度、时间及p53蛋白的表达，相比骨肉瘤MG-63细胞均有明显差异。这与阻断mTOR后可能会降低骨肉瘤细胞对DAPT的敏感性有关,然后，Notch信号通路与p53在凋亡过程中的联合作用被同步抑制。

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前言

1 材料和方法

1.1 主要材料及试剂

1.2 仪器和设备

1.3 实验方法

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 光镜下两种细胞株的形态及密度比较

2.2 划痕实验检测MG-63细胞及耐RAPA的MG-63细胞的迁移能力

2.3 不同浓度DAPT、RAPA对两组细胞株增殖的影响

2.4 Traswell法检测两细胞株的侵袭能力

2.5 DAPT 及RAPA对两组细胞株凋亡的影响

2.6 两组细胞株p53蛋白的表达

3 讨 论

4 结 论

附 录1

附 录2

附 录3

附 录4

综述: Notch及mTOR在人成骨肉瘤多药耐药性中的研究现状与进展

致谢

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