以PAI-1为靶点的具有减肥作用的复方中药制剂的初步筛选

摘要

目的：利用MTT及荧光定量PCR技术，以3T3-L1细胞系为工具，研究6种中药复方制剂对人纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）基因表达的影响，观察不同浓度方剂制剂 PAI-1mRNA的表达情况，了解其影响因素，探讨中药复方制剂在治疗肥胖症中的分子生物学机制。
　　方法：
　　1．制备6种不同中药方剂的水溶性提取物(ECMH)，体外培养3T3-L1小鼠前体脂肪细胞，分别以不同浓度（0.001、0.01、0.1、1、10）mg/ml的ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h，通过细胞形态学和MTT法判断其对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响，并进行统计学分析，初步筛选出对细胞有影响但损伤较小的最佳药物浓度；
　　2．采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术分别检测6种ECMH对小鼠3T3-L1前体脂肪细胞分泌因子PAI-1 mRNA水平的影响，根据统计分析结果筛选可用于减肥的中药复方制剂。
　　结果：
　　1．ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h后均使细胞发生形态变化，不同浓度 ECMH均可不同程度地抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖。除小承气汤外，各方剂ECMH1mg/ml均为抑制率最高的浓度，与正常对照组相比，减肥胶囊、防风通圣散、防己黄芪汤、泽泻汤四方各浓度均具有统计学意义，除参苓白术散10mg/ml，小承气汤100ug/ml、1ug/ml外，此两种复方其余各浓度均具有统计学意义；
　　2．RT-PCR技术检测得出，6种中药复方制剂3种不同浓度ECMH对脂肪细胞PAI-1 mRNA表达均具有不同程度的促进作用。与正常组相比，防风通圣散、小承气汤、参苓白术散三种复方三种不同浓度均具有统计学意义，泽泻汤1mg/ml，减肥胶囊10mg/ml、防己黄芪汤10mg/ml不具有统计学意义，此三方其余各浓度均具有统计学意义。
　　结论：
　　1、6种中药复方制剂不同浓度均可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。
　　2．6种中药复方制剂均可促进3T3-L1前脂肪细胞 PAI-1的表达，通过影响肥胖基因的表达，抑制脂肪细胞的分泌，达到减肥的目的。

目录

封面

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中文摘要

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缩略词

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3. 统计学方法

结果

1. 不同浓度ECMH对3T3-L1前体脂肪细胞形态学的影响

2．不同浓度ECMH对3T3-L1前体脂肪细胞增殖的影响

3. 不同浓度ECMH对3T3-L1前脂肪细胞PAI-1mRNA表达的影响

讨论

1．肥胖症的现状及危害

2．传统中药对肥胖症治疗的研究

3．纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1）的结构及研究进展

4．PAI-1与肥胖相关研究

5 ．中药对PA I-1治疗现代相关性研究

6． 方药分析

7．本实验六味中药复方制剂对肥胖症的作用初选

8．问题与展望

结论

致谢

参考文献

附录 1 6种复方中药制剂不同浓度的MTT检测结果

附录2 综 述肥胖症与PAI-1基因关系研究进展

附录3 在读期间论文论著、科研情况及奖励情况