MPTP诱导的食蟹猴慢性偏侧帕金森病模型行为学评价研究

摘要

帕金森病(Parkinson disease，PD)是一种常见的以运动迟缓、姿势步态异常等运动症状为主的同时伴有睡眠障碍、认知缺失等多种非运动症状的多系统神经变性疾病，患病率在全人群约为0.3％，在我国65岁以上老年人群的患病率约为1.7％。由于PD发病隐匿，尽管经过多年来研究人员的不懈努力，多种致病学说也相继被提出，但确切的致病机制仍不明了，所以对类似于原发性PD的动物模型的研究，可能突破科研及药物临床应用的瓶颈。
　　非人灵长类动物运动行为特点与人类颇为相似，是最佳的用于建立PD动物模型的动物资源，并且神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)建立的模型最接近于PD的临床特点，使得非人灵长类MPTP模型几乎是目前为止最理想的PD动物模型。然而，在先前的报道中，研究者较多关注建模动物短期的变化，鲜见对动物建模6年后的报道，未能对模型动物进行长期随访性的回顾性研究分析，以致MPTP长期诱导下的非人灵长类食蟹猴PD模型运动与非运动行为变化未明确。
　　目的:
　　本课题拟通过对食蟹猴PD模型建模期视频录像评分和影像学PET数据分析，以确定经手术向动物左颈内动脉注射神经毒素MPTP成功构建稳定的偏侧PD模型，再运用多项测试装置进行包括临床评分、上肢精细运动、总体运动活动监测和工作记忆-认知功能等实验研究，旨在明确MPTP长期诱导下的食蟹猴PD模型运动与非运动行为的变化，为PD早期诊断和药物治疗提供重要的理论依据。
　　方法:
　　1通过对食蟹猴左侧颈内动脉注射MPTP构建偏侧PD模型建模期的视频录像进行评分和影像学PET数据分析，以确定成功构建稳定的食蟹猴PD模型;
　　2将建模6年后食蟹猴的视频录像评分同建模期对比，明确MPTP长期诱导下食蟹猴全身症状发生的变化;
　　3进而利用九孔取食板、MAP装置、固定猴椅分析PD模型食蟹猴与正常对照组食蟹猴上肢精细运动功能之间的差异;
　　4利用身体活动监测器PAM，对两组食蟹猴在饲养笼每日的运动活动量分析，并将不同时间段的运动量分别比较，据此了解食蟹猴PD模型运动量与睡眠状况同正常猴的差异;
　　5最后，通过DMTS认知测试装置，来了解MPTP长期诱导下的慢性偏侧帕金森病食蟹猴工作记忆-认知功能方面的特点，以及同正常组食蟹猴比较，分析存在的差异。
　　结果:
　　对食蟹猴PD模型建模期的视频录像评分结果显示，在注射MPTP术后3个月内，所有食蟹猴临床评价分值均可达到10分以上，影像学PET数据分析显示，食蟹猴受损侧的纹状体F18-AV133的摄取率较正常侧显著降低（约46.4％）。
　　对食蟹猴PD模型当前视频录像分析结果显示，建模6年后食蟹猴帕金森病临床症状评分（5.59±1.392分）较比MPTP建模期有所降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)。对两组食蟹猴上肢精细运动功能分析显示，在九孔取食板取食时间测定中，正常对照组左右侧上肢取食用时分别为(702.852±44.307ms)、(710.119±69.020ms)，两侧差异无统计学意义，PD组右侧（毁损侧对侧）上肢拒绝执行取食操作、左侧（毁损侧）上肢取食用时为(954.397±98.909ms)，相比正常对照组显著延长，差异具有统计学意义（P＜0.01）;在MAP装置取食时间测定中，食蟹猴一侧上肢执行单次取食过程包含的伸肌运动、手部运动、屈肌运动，其用时在PD组左侧依次为(0.139±0.029s)、(0.448±0.091s)、(0.187±0.052s)，正常组左侧依次为(0.113±0.021s)、(0.289±0.050s)、(0.157±0.048s)，相比正常组，PD组取食运动过程中包含的3个成分用时均显著延长，且差异有统计学意义(P＜0.01)，其中PD组右侧拒绝执行取食操作，正常组两侧差异均无统计学意义;在固定猴椅取食实验中，食蟹猴PD模型左右两侧上肢取食次数分别为(8.40±1.173)、(1.31±0.485)。
　　身体活动量监测器PAM表明，食蟹猴PD模型全天24h总运动量及昼光12h运动量较正常对照组均显著减少，而夜光12h运动量显著增加。工作记忆-DMTS认知测试显示，在Delay时间为0s时，测试第1天两组食蟹猴推板正确率差异不明显，在第5天测试中，PD组正确率出现严重下降（约降至55％），而正常组依然保持在80％以上，在测试的第8天，PD组正确率降至约47％，相反正常组动物的推板正确率提高至90％左右;在Delay时间为随机5s、15s、30s时，正常组正确率在5s时最高（约86％）、30s时最低（约72％），而PD组在不同延迟条件下正确率差异无统计学意义，均低于正常组。
　　结论:
　　经手术向食蟹猴左侧颈内动脉注射神经毒素MPTP可构建稳定的偏侧PD模型;食蟹猴PD模型建模6年后帕金森病症状较比MPTP建模期有所减轻;MPTP长期诱导下的食蟹猴PD模型其给药对侧纹状体亦受损伤，此外还造成食蟹猴睡眠障碍和学习认知功能缺失;MPTP对食蟹猴脑组织损伤非限于黑质纹状体结构区域，需结合相关实验做进一步深入研究。

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摘要

前言

第一部分 MPTP食蟹猴偏侧帕金森病模型的建立

一 实验材料

二 实验方法

三 实验结果

四 讨论

第二部分 MPTP食蟹猴慢性偏侧帕金森病模型行为学评价研究

一 实验材料

二 实验方法

三 实验结果

四 讨论

参考文献

综述 α-synuclein生物学特性及在帕金森病的传播

致谢

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