DNA修复基因XPC、ERCC1和XPF在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义

摘要

目的:采用RT-PCR技术检测原发性肝癌组织中DNA修复基因XPC、ERCC1和XPF mRNA表达水平，并分析各基因mRNA表达水平与肝癌临床病理特征及术后复发时间之间的关系，初步探讨三者在原发性肝癌中的表达意义及疾病进展、预后中所起的作用。
　　方法:选取广西医科大学附属肿瘤医院2007年3月至2013年12月期间符合入组条件的73例原发性肝癌病例，并选取21例距手术切缘大于1cm的癌旁组织为对照，所有患者术前术后均未接受放化疗、介入治疗及分子靶向治疗等。提取所有标本总RNA进行电泳质控检测，应用RT-PCR方法检测肝癌组织和癌旁组织中XPC、ERCC1和XPF的mRNA表达水平，运用Western Blot(W-B)方法检测随机选取的10例肝癌组织和对应癌旁组织中三个基因的蛋白表达状况。分析各基因mRNA表达水平在癌组织和癌旁组织的差异及与肝癌临床病理特征、术后复发时间的关系。应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析。均以α=0.05作为检验标准，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　1.电泳结果显示，入组标本总RNA均有不同程度的降解，但仍不影响后续的RT-PCR检测。
　　2.XPC、ERCC1和XPF mRNA扩增曲线呈明显“S”型，指数增长期曲线基本平行，且溶解曲线呈单峰型，说明目的基因扩增效率好、扩增产物特异性高。
　　3.XPC和XPF mRNA在癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P＜0.05); ERCC1 mRNA在癌组织中的表达水平低于癌旁组织，但差异无统计学意义（P＞0.05）。XPC、ERCC1和XPF在癌组织和癌旁组织中均有蛋白水平的表达。
　　4.XPC mRNA在合并肝硬化患者中的表达水平较未合并肝硬化患者显著增高（P＜0.05）。但在其他不同的临床病理特征分组中，XPC mRNA的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。XPC mRNA在术后复发时间≤6m组、＞6m且≤12m组、＞12m且≤18m组、＞18m且≤24m组及＞24m组间表达水平的总体差异具有统计意义(P＜0.05)，其中在＞12m且≤18m组表达最高，在≤6m组表达最低。XPC mRNA在术后复发时间≤12m组、＞12m且≤24m组及＞24m组之间的表达存在显著差异（P＜0.05），其中在＞12m且≤24m组表达水平最高，而在≤12m组表达水平最低。
　　5.ERCC1 mRNA在被膜侵犯组的表达水平较无被膜侵犯组显著降低(P＜0.05)。但在其他不同的临床病理特征和术后不同时间复发分组之间，ERCC1 mRNA表达无显著差异（P＞0.05）。
　　6.XPF mRNA表达水平与术前ALT水平、肿瘤大小、被膜侵犯、TNM分期及术后复发时间相关。术前ALT水平≤2.5倍正常值患者XPF mRNA表达水平较＞2.5倍正常值患者低。肿瘤最大径≤5cm的患者XPF mRNA表达水平较肿瘤最大径＞5cm患者低。被膜侵犯的患者XPF mRNA表达水平较无被膜侵犯的患者低。TNM分期中，Ⅱ期患者XPF mRNA表达水平最低，Ⅲ期患者XPF mRNA表达水平最高，Ⅰ期患者XPF mRNA表达水平介于两者之间，差异均有统计意义（P＜0.05）。XPF mRNA表达水平在术后复发时间≤6m组、＞6m且≤12m组、＞12m且≤18m组、＞18m且≤24m及＞24m组之间具有显著差异(P＜0.05)，其中在≤6m组，XPFmRNA表达水平最低，随着术后时间的延长，表达水平逐渐升高，在＞12m且≤18m组表达最高，之后 XPF mRNA表达水平就逐渐下降。
　　7.XPC与ERCC1、XPC与XPF及ERCC1与XPF在肝癌组织中的mRNA表达水平均存在正性相关。XPC mRNA表达水平越低，ERCC1 mRNA的表达水平也越低;XPC mRNA的表达水平越低，XPF mRNA的表达水平也越低; ERCC1mRNA表达水平越低，XPF mRNA的表达水平也越低。
　　8.XPC高表达、ERCC1高表达且XPF高表达组术后2年内复发率与XPC低表达、ERCC1低表达且XPF低表达组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。XPC高表达、ERCC1高表达且XPF低表达组、XPC高表达、ERCC1低表达且XPF高表达组和XPC低表达、ERCC1高表达且XPF高表达组术后2年内复发率存在统计学差异（P＜0.05）。
　　结论:
　　1.XPC和XPF mRNA在肝癌组织和癌旁组织中的表达水平具有显著差异，癌组织中XPC和XPF mRNA表达水平显著低于癌旁组织。ERCC1 mRNA在肝癌组织的表达处于低水平状态。这三个基因在蛋白质水平均有表达。
　　2.XPC mRNA表达水平与肝硬化密切相关，合并肝硬化，XPC mRNA表达水平就越高。ERCC1 mRNA表达水平与被膜侵犯有关，被膜侵犯，ERCC1 mRNA表达水平就越低。XPF mRNA表达水平与术前ALT水平、肿瘤大小、被膜侵犯及TNM分期相关。XPC和XPF mRNA表达水平可能与术后复发时间相关。
　　3.XPC与ERCC1、XPC与XPF及ERCC1与XPF在肝癌组织中的mRNA表达水平均呈正性相关，XPC、ERCC1和XPFmRNA在肝癌组织中的表达降低具有一致性。
　　4.XPC、ERCC1和XPF mRNA联合表达的状态可能与患者术后2年内复发有关。

目录

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摘要

前言

材料与方法

1．研究对象

2．随访

3．总R№的质控

4．RT-PCR实验方法

5．Western Blot实验

6．统计分析

1．总RNA的质控

2．扩增曲线、标准曲线及溶解曲线

3．XPC、ERCC1及XPF mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达情况

4．XPC、ERCC1及XPF蛋白在癌组织及癌旁组织中的表达情况

5．肝癌组织中XPC mRNA的表达与临床病理特征之间的关系

6．肝癌组织dPERCC1 mRNA的表达与临床病理特征之间的关系

7．肝癌组织中XPF mRNA的表达与临床病理特征之间的关系

8．XPC、ERCC1及XPF mRNA在肝癌中表达的相关性分析

9．XPC、ERCC1和XPF联合表达的不同状态与术后复发时间之间的关系

讨论

1．XPC与恶性肿瘤

2．ERCC1与恶性肿瘤

3．XPF与恶性肿瘤

4．肝癌组织中XPC、ERCC1及XPF mRNA三者表达水平的相关性

5．XPC、ERCC1和XPF联合表达的不同状态与术后复发时间之间的关系

6．创新与不足

结论

参考文献

综述 ERCC1与肿瘤发生、铂类化疗敏感性及预后关系的研究进展

致谢