萝卜硫素对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移影响的研究

摘要

目的：肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)是临床上的一种较为常见的疾病，其病因十分复杂，可由多种心、肺或肺血管疾病等引起。肺血管阻力升高是PH的重要特征。肺血管重塑是肺血管阻力增加的一个重要病理学因素，而血管平滑肌细胞异常增殖和迁移是血管重塑的重要病理基础。慢性缺氧可以使肺血管收缩、血管壁的张力增高，另外缺氧时肺内会产生很多种细胞因子及生长因子，可以直接作用刺激血管壁平滑肌细胞以及内膜弹力纤维增生，最终导致肺血管阻力增高。舒张肺血管、缓解肺血管重塑是目前临床药物治疗PH的重要措施。本研究通过设计缺氧细胞实验模型，探讨萝卜硫素是否对肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移存在抑制作用，为肺动脉高压的药物治疗提供参考信息。
　　方法：购买原代人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC），常规培养、传代，选取4-6代处于对数生长期生长状态良好的细胞用于实验。1.MTT法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC增殖的影响。随机将实验分为6组:实验组A往细胞加入0.5μmol·L-1萝卜硫素干预，实验组B往细胞内加入1μmol·L-1萝卜硫素干预，实验组C往细胞加入5μmol·L-1萝卜硫素干预，实验组D往细胞加入10μmol· L-1萝卜硫素干预，实验组E往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预，对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按实验分组加入对应的药物后，放进缺氧环境内培养12h、24h、48h、72h后，用MTT法检测细胞的吸光度（OD值），然后计算出HPASMC的增殖抑制率。2.用Transwell小室法检测萝卜硫素对缺氧HPASMC的迁移情况。随机将实验分为5组:实验组A往细胞加入1μmol· L-1萝卜硫素干预，实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预，实验组C往细胞加入10μmol· L-1萝卜硫素干预，实验组D往细胞加入20μmol·L-1萝卜硫素干预，对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物，将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。用Transwell小室的方法，最后得出各组HPASMC的迁移数。3.用Western Blot法测定萝卜硫素对缺氧HPASMC p38蛋白的表达情况。随机将实验分为4组:实验组A往细胞加入1μmmol·L-1萝卜硫素干预，实验组B往细胞内加入5μmol·L-1萝卜硫素干预，实验组C往细胞加入10μmol·L-1萝卜硫素干预，对照组往细胞加入等量的PBS液干预。按照实验分组加入相应的干预药物，将细胞转移到缺氧的环境内培养48h。常规提取细胞总蛋白，按Western Blot法得到p38蛋白和β-Actin蛋白的灰度条带。最后对凝胶图像进行分析得到p38蛋白的相对表达量。
　　结果：1.MTT法检测HPASMC增殖结果显示，实验组A、B、C、D、E的HPASMC的细胞增殖抑制率均比对照组高(P＜0.05);对于细胞增殖抑制率，实验组A比对照组高(P＜0.05)，实验组B比实验组A高(P＜0.05)，实验组C比实验组B高(P＜0.05)，实验组D比实验组C高(P＜0.05)，实验组E比实验组D高(P＜0.05)。各个浓度组内，24h细胞增殖抑制率比12h高(P＜0.05)，48h的比24h的高(P＜0.05)，72h的比48h的高(P＜0.05)。
　　2.Transwell小室法检测HPASMC迁移的结果显示，药物干预48h后，实验组A、B、C、D的HPASMC迁移数均比对照组少(P＜0.05);对于细胞迁移数，实验组A比对照组少(P＜0.05)，实验组B比实验组A少(P＜0.05)，实验组C比实验组B少(P＜0.05)，实验组D比实验组C少(P＜0.05)。3.Western Blot法测定HPASMC中p38蛋白表达的结果显示，药物干预48h后，实验组A、B、C人肺动脉平滑肌细胞p38蛋白的表达均比实验组增少(P＜0.05);细胞内p38蛋白的表达量，实验组A比对照组少(P＜0.05)，实验组B比实验组A少(P＜0.05)，实验组C比实验组B少(P＜0.05)。
　　结论：萝卜硫素可以明显抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移，并可抑制缺氧人肺动脉平滑肌细胞的p38蛋白表达。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

材料和方法

1．实验材料

2．实验方法

结果

1．萝卜硫素对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

2．萝卜硫素对人肺动脉平滑肌细胞迁移的影响

3．萝卜硫素对人肺动脉平滑肌细胞p38蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

文献综述 肺动脉高压发生的细胞及分子机制探讨

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文