苦参素影响ARID1A在肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H中的表达

摘要

目的:检测ARID1A基因与蛋白在人肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝细胞株L02中表达的变化，并观察苦参素(OM)对不同转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H的抑制作用及其对ARID1A表达的影响，探讨苦参素抑制肝癌的可能作用机制。
　　方法:以人肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝细胞株L02细胞为研究对象。(1)利用细胞免疫荧光技术检测ARID1A在3种细胞中的表达与定位;(2)用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术分别检测ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在3种细胞株中的表达;(3) MTT法检测OM对MHCC97L和MHCC97H细胞增殖的影响;(4)用qRT-PCR技术和Western blot技术分别检测OM干预后ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在2株肝癌细胞中的表达。
　　结果:
　　(1)细胞免疫荧光检测发现ARID1A在MHCC97L、MHCC97H和L02细胞有不同表达，且均定位于细胞核中;
　　(2) qRT-PCR检测结果发现，ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中的表达均低于L02细胞，但在MHCC97L和MHCC97H之间的相对表达量比较无差异;
　　(3) Western blot检测结果发现在MHCC97L和MHCC97H细胞中BAF250a蛋白的表达均低于L02细胞，但在MHCC97L和MHCC97H之间的表达比较无差异。
　　(4) MTT法观察发现不同浓度和时间OM干预MHCC97L和MHCC97H细胞后，OM浓度越高，细胞生长抑制率越高，呈剂量依赖性，随着OM干预时间延长无明显时间依赖性。
　　(5) qRT-PCR检测OM干预MHCC97L和MHCC97H细胞后发现:与阴性对照组0mg/ml组比较，在浓度为0.5mg/ml-2.0mg/ml范围时，ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中相对低表达，但在浓度为1.0mg/ml-4.0mg/ml范围时其相对表达量显示出上升趋势。同一浓度下ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中的表达无明显差异。
　　(6) Western blot检测OM干预MHCC97L和MHCC97H后与对照组0mg/ml组比较，MHCC97L和MHCC97H细胞中BAF250a蛋白在OM浓度为0.5-4.0mg/ml范围时表达量增多。在0.5mg/ml和1.0mg/ml浓度下，MHCC97L细胞中BAF250a蛋白的表达高于MHCC97H细胞。
　　结论:
　　(1)ARID1A在肝癌细胞系和L02中存在不同的表达，MHCC97L和MHCC97H细胞中ARID1A的表达低于人正常肝细胞株L02。
　　(2)苦参素对MHCC97L和MHCC97H人肝癌细胞株有抑制作用，苦参素能促进MHCC97L和MHCC97H肝癌细胞系中ARID1A编码的蛋白的表达，对恶性程度较低的MHCC97L细胞作用较明显;上调ARID1A蛋白的表达可能是苦参素抑制肝癌细胞增殖的分子机制之一。

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个人简历

摘要

前言

第一部分 ARID1A在人肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H中表达的情况

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

第二部分 苦参素对人肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H增殖的影响及其干预后对ARID1A表达的影响

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、结论

全文结论

不足与展望

参考文献

附表

综述 人肝癌细胞株的特性及其实验应用

致谢

攻读学位期间发表的论文