基于“病证-效应-生物样本分析”方法的炮姜温中药效及其归经研究

摘要

目的：考察炮姜水提液对脾胃虚寒大鼠温中药效，阐明其温中作用的物质基础，通过观察其指标成分在阴性对照组和脾胃虚寒组大鼠体内的代谢分布，探讨炮姜的归经。
　　方法：
　　1、将大鼠随机分为阴性对照组，模型组、阳性组、高剂量组、低剂量组和正常给药组。除阴性对照组和正常给药组外，其余四组均灌胃4℃米醋1ml/100g（总酸度≥4g/100ml）连续10d制备大鼠脾胃虚寒模型，造模第五天下午开始给药，阳性组灌胃附子理中丸混悬液6.0g2kg-1，高剂量组和正常给药组灌胃炮姜水提液15g2kg-1，低剂量组灌胃炮姜水提液7.5g2kg-1观察大鼠外观及行为变化并比较大鼠第二、四、六、八、十天的进食量、饮水量、体重变化值、肛温，造模结束后测定各组大鼠脏器系数、小肠推进率、胃排空率和血清及胃中胃泌素、胃动素测定值，测得数据用 SPSS17.0软件处理，评价炮姜对脾胃虚寒大鼠的温中作用。
　　2、高剂量组和正常给药组大鼠于给药后5min、10min、20min、30min、40min、60min、90min、120min、240min、360min，每个时间点各组均取两只动物摘眼球取血，为了进一步诠释炮姜温中药效物质基础，联合应用 UV-HPLC检测对炮姜提取物、含药血清和正常血清的HPLC图谱比较分析，确定炮姜入血的有效物质。摘眼球取血立即推颈椎处死采集心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、脑等组织，HPLC检测有效物质在大鼠各组织中的浓度，检测数据用 DAS2.0软件处理得到相关药动学参数，通过比较炮姜指标性成分在正常给药组和高剂量组大鼠各脏器组织中的最早检测时间、富集浓度、维持时间等探讨炮姜在正常和脾胃虚寒情况下大鼠体内的组织分布和归经情况，并比较炮姜在正常给药组和脾胃虚寒组组织分布和归经的差异。
　　结果：
　　1.与模型组比较，高剂量炮姜水提液显著改善脾胃虚寒模型大鼠的外观状态；提高进食量、饮水量；显著增加脾胃虚寒模型体重值；提高大鼠胃排空和小肠推进率；显著增加肝脏系数、脾脏系数、和胸腺系数；显著增加血清和胃组织液中GAS、MTL测定值（P<0.05或 P<0.01）。说明炮姜具有温中的药效。
　　2.温中药效物质基础的确定：通过对炮姜提取物、含药血清和正常血清的HPLC图谱比较分析，确定炮姜入血的有效物质为6-姜酚、6-姜烯酚和8-姜酚。
　　3.体内分布的结果显示:大鼠灌胃炮姜高剂量水提液后，6-姜酚、6-姜烯酚和8-姜酚广泛地分布于脑、胃、大肠、小肠、心、肝、脾、肺、肾等组织中，给药后5min即可在大鼠体内检测到，并且可持续到360min；在脾胃虚寒组的组织中，维持时间的比较结果是6-姜酚为胃=脾＞肺=小肠＞肝=脑＞心=血清=肾=大肠，6-姜烯酚为胃＞脾=小肠＞肝=大肠＞肺=心=肾＞脑>血清，8-姜酚为胃=脾=肝=心＞大肠＞脑=小肠＞血清＞肺。6-姜酚在组织中的AUC0-t依次为胃＞小肠＞肝＞大肠＞脾＞肺＞肾＞脑＞血清＞心，6-姜烯酚在组织中的AUC0-t依次为胃＞大肠＞小肠＞肝＞脾＞肺，8-姜酚在组织中的AUC0-t依次为胃＞肝＞心。在正常给药组的组织中，维持时间的比较结果是6-姜酚为胃＞肝=肺=血清=脑=小肠＞肾=心=脾＞大肠，6-姜烯酚为胃＞小肠＞肝=大肠＞肺=肾＞脾=心=血清，8-姜酚为胃＞脾＞肾=肺=心=小肠＞血清。6-姜酚在组织中的AUC0-t依次为胃＞小肠＞肝＞肺＞脾＞肾＞大肠＞脑＞血清＞心，6-姜烯酚在组织中的AUC0-t依次为胃＞大肠＞小肠＞肝＞肺，8-姜酚在组织中的AUC0-t依次为脾＞胃。
　　结论：
　　炮姜的药效学实验显示其具有显著地温中作用，通过测定血清中炮姜物质发现6-姜酚、6-姜烯酚和8-姜酚均可在血清中测到，并可不同程度的分布在脑、胃、大肠、小肠、心、肝、脾、肺、肾等脏器组织中，说明这三种物质为炮姜温中药效物质。通过综合考虑三种成分在各脏器组织中的最早检测时间、维持时间和富集浓度等得出，炮姜在脾胃虚寒组中和阴性对照组主要归胃、脾、肝、肾，与文献记载其归经基本吻合。但炮姜三种指标性成分在比较脾胃虚寒组和正常给药组大鼠脏器的物质浓度有所不同，说明在不同证下炮姜的对不同脏器的作用强度不同，归属有差异。

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前言

一、炮姜药材质量评价

1 实验材料

2 溶液制备

3 色谱条件

4 方法学考察

5 样品测定

6 结果

7 小结

二、炮姜对脾胃虚寒模型大鼠温中药效观察

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

三、炮姜温中功效物质及其体内组织分布观察

1 实验材料

2 实验方法

3 HPLC-UV 含量测定方法

4 方法学考察

5 结果

6 小结

讨论

1 炮姜对脾胃虚寒模型大鼠的影响

2 对炮姜功效物质的认识

3 炮姜功效物质在大鼠体内组织分布的意义

4 生物样品处理方法的讨论

5 药动学参数考察的讨论

结论

致谢

参考文献

附录

综述： 炮姜归经的现代研究进展

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