血府逐瘀汤及外源性甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠神经再生修复的影响

摘要

本文主要从以下几方面进行论述： 第一部分 血府逐瘀汤对重型颅脑损伤大鼠BDNF、NGF的影响 目的：通过观察血府逐瘀汤对重型颅脑损伤大鼠海马组织中脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)、神经生长因子(Nerve growth factor，NGF)表达的影响，探讨其对重型颅脑损伤大鼠的神经再生修复作用。 方法：将90只SPF级健康雄性SD大鼠随机分成5组，正常对照组、模型非用药组、血府逐瘀汤低剂量组、血府逐瘀汤中剂量组和血府逐瘀汤高剂量组，每组18只。按照造模后第1、3、7天再分为三个亚组，每个时间点6只。除正常对照组外，其余各组采用改良的Feeney's自由落体方法制备重型颅脑损伤大鼠模型。造模后6h，正常对照组和模型非用药组给予生理盐水灌胃，血府逐瘀汤低、中、高剂量组分别给予相应浓度的血府逐瘀汤水提取物灌胃，每日一次，3ml/次，连续7天。分别在造模后第1、3、7天三个时间点各取6只大鼠进行神经功能缺损评分;然后麻醉大鼠进行取材，观察脑组织的病理变化，并检测大鼠海马组织BDNF和NGF蛋白的表达。 结果：(1)重型颅脑损伤大鼠神经功能缺损评分呈高水平状态，随着时间的延长，其评分逐渐降低，并在第7天降至最低(P＜0.05)。给予低剂量的血府逐瘀汤后，大鼠神经功能缺损评分在第7天明显降低(P＜0.05)，中剂量组在第3天和第7天神经功能缺损评分均明显降低（P＜0.05），血府逐瘀汤高剂量组无明显改变。 (2)正常对照组大鼠脑组织结构完整无病理改变;模型非用药组大鼠可见脑组织间隙出血，炎症细胞浸润，核固缩等，随着时间延长逐渐改善，血府逐瘀汤低、中、高剂量组在三个时点病理改变均比模型组轻。 (3)正常对照组大鼠海马BDNF蛋白有少量表达，模型非用药组、血府逐瘀汤低、中、高剂量组大鼠海马组织中两种蛋白的表达在伤后三个时间点均明显升高（P＜0.05）;与模型非用药组比较，血府逐瘀汤低剂量和中剂量组在第7天均明显升高(P＜0.05)，而高剂量组三个时间点无明显变化。 (4)与正常对照组比较，其余四组大鼠海马组织NGF的表达在损伤后三个时间点均明显上调（P＜0.05）。与模型非用药组比较，血府逐瘀汤低量组和中剂量组NGF的表达在第3天明显升高(P＜0.05)，并持续至第7天。而高剂量组无明显改变。 结论：血府逐瘀汤可以通过促进神经营养因子BDNF和NGF蛋白的分泌对重型颅脑损伤大鼠神经组织的修复发挥作用。 第二部分 外源性甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响 目的：通过观察外源性补充甲状腺素对重型颅脑损伤大鼠海马Wnt3amRNA、β-catenin mRNA及BDNF、NGF、S100B蛋白表达的影响，探讨其对重型颅脑损伤大鼠的神经再生修复作用。 方法：将108只SPF级健康雄性SD大鼠随机分成6组，正常对照组、正常干预组，模型非用药组、甲状腺素低剂量组、甲状腺素中剂量组和甲状腺素高剂量组，每组18只。按照造模后第1、3、7天再分为三个亚组，每个时间点6只。除正常对照组和正常干预组外，其余各组采用改良的Feeney's自由落体方法制备重型颅脑损伤大鼠模型。造模后6h，正常对照组和模型非用药组给予生理盐水灌胃，正常干预组、甲状腺素低剂量组、甲状腺素中剂量组和甲状腺素高剂量组给予相应浓度的甲状腺素灌胃，每日一次，2ml/次，连续7天。分别在造模后第1、3、7天三个时间点各取6只大鼠进行神经功能缺损评分;然后麻醉大鼠，采集各组大鼠外周血及脑组织标本。ELISA法检测外周血S100B蛋白的水平;HE染色方法观察脑组织的病理变化;RT-PCR法检测大鼠海马Wnt3a和β-catenin mRNA的相对表达量;免疫组化方法检测海马BDNF和NGF蛋白的表达。 结果：(1)正常对照组和正常干预组大鼠无神经功能缺损。造模后，重型颅脑损伤大鼠神经功能缺损评分明显升高，随着时间的延长，其评分逐渐降低，并在第7天降至最低(P＜0.05)。给予甲状腺素后，各组大鼠神经功能缺损评分出现不同程度改变。其中甲状腺素中剂量组和高剂量组在第3天和第7天神经功能缺损评分明显降低（P＜0.05），甲状腺素低剂量无明显改变。 (2)大鼠血清SIOOB蛋白的含量在重型颅脑损伤后第1天即明显升高(P＜0.05)，一直持续至第7天。甲状腺素中剂量、高剂量组S100B水平在3天开始明显降低(P＜0.05)，而甲状腺素低剂量组无明显改变。 (3)光镜下观察正常对照组和正常干预组大鼠脑组织结构完整无病理改变;模型非用药组大鼠可见脑组织间隙出血，炎症细胞浸润，核固缩等，随着时间延长损伤逐渐减轻，甲状腺素低剂量组、中剂量组和高剂量组三个时段病理改变均比模型非用药组轻。 (4)与正常对照组比较，模型非用药组、甲状腺素低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠海马组织wnt3a mRNA的表达在损伤后三个时间点均明显上调(P＜0.05);正常干预组无明显改变。与模型非用药组比较，甲状腺素低剂量组wnt3a mRNA的表达在第7天明显升高;中剂量组和高剂量组大鼠在第3天和第7天均明显升高(P＜0.05)，但二者升高程度无明显差异。模型非用药组和甲状腺素低剂量组wnt3a mRNA的表达在第1天和第3天无明显改变，第7天明显升高(P＜0.05);甲状腺素中剂量组和高剂量组则随时间逐渐升高，第7天升高至峰值(P＜0.05)。 (5)与正常对照组大鼠比较,正常干预组大鼠海马组织中的β-cateninmRNA的表达无明显改变，其余四组在三个时间点均明显上调(P＜0.05);与模型非用药组比较，甲状腺素低剂量组在第7天明显升高;中剂量组和高剂量组在三个时间点均明显升高（P＜0.05）。正常对照组、正常干预组和模型非用药组大鼠β-catenin mRNA的表达随时间无明显改变;同组别内，甲状腺素低剂量组在7天表达明显升高(P＜0.05);中剂量组和高剂量组β-catenin表达随时间逐渐升高，第7天达到峰值(P＜0.05)，但二组之间无明显差异。 (6)正常对照组和正常干预组大鼠海马有少量BDNF蛋白表达，其余四组在伤后三个时间点均明显升高(P＜0.05)。与模型非用药组比较，甲状腺素低剂量组在三个时间均无明显改变，而中剂量组和高剂量组大鼠在三个时间点均明显升高（P＜0.05）;与甲状腺素低剂量组比较，中剂量组和高剂量组大鼠海马BDNF在三个时间均升高(P＜0.05)。在同组内，模型非用药组在第3天达到高峰，在第7天下降，但仍高于正常对照组（P＜0.05）。甲状腺素中剂量组和高剂量组变化趋势同模型非用药组（P＜0.05）。 (7)正常对照组和正常干预组大鼠海马区细胞有少量NGF蛋白表达。与正常对照组大鼠比较，模型非用药组、甲状腺素低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠NGF蛋白在三个时间点均明显升高（P＜0.05）。与模型非用药组大鼠比较，甲状腺素低剂量组大鼠NGF蛋白无明显变化。与模型非用药组和甲状腺素低剂量组比较，中剂量组和高剂量组大鼠NGF的表达在三个时间点均明显升高（P＜0.05）。在同组内，正常对照组、正常干预组和甲状腺素低剂量组大鼠NGF在三个时间点无明显变化;其余三组在第3天达到高峰，在第7天表达下降（P＜0.05）。 结论：外源性甲状腺素对正常大鼠Wnt/β-catenin信号通路无影响，但在颅脑损伤情况下，外源性甲状腺素能够明显促进该信号通路mRNA的表达及BDNF和NGF蛋白的分泌，并抑制S100B蛋白的水平。