单次临床剂量顺铂诱导大鼠肾间质纤维化及金纳多注射液对其改善作用的研究

摘要

目的: 1.探讨单次临床剂量顺铂(cis-dischlorodiamm ine-platinum，CDDP)对大鼠肾间质纤维化指标的影响。 2.探讨银杏叶提取物（Ginkgo Biloba extract，EGb）注射液（金纳多）对顺铂诱导的大鼠肾间质纤维化的改善作用及其可能机制，为临床上顺铂肾间质纤维化的治疗提供理论依据。 方法: 1.单次临床剂量顺铂诱导大鼠肾间质纤维化: 将96只雄性SD大鼠随机分为正常组和顺铂组，每组48只。正常组与顺铂组大鼠于实验第1天分别单次腹腔注射等体积生理盐水和顺铂5mg/kg。两组大鼠分别于第8、14、21、30、40、50、60和90天共8个时间点分别处死6只大鼠。采用全自动生化分析仪测定血清尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)和肌酐(Serum creatinine，Scr)水平，采用HE染色评定肾小管间质损伤程度，采用Masson染色评定肾小管间质纤维化相对面积，采用SP法免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在肾组织中的表达情况。 2.金纳多注射液改善顺铂诱导大鼠肾间质纤维化: 将45只雄性SD大鼠随机分为正常组、顺铂组、金纳多低、中、高剂量组，每组9只。正常组:于实验第1天和第22至40天，腹腔注射等体积生理盐水，每天1次。顺铂组:于实验第1天单次腹腔注射顺铂5.0mg/kg，第22至40天腹腔注射等体积生理盐水，每天1次。金纳多低、中、高剂量组:于实验第1天单次腹腔注射顺铂5.0mg/kg，第22至40天分别腹腔注射金纳多注射液1.58、3.17、6.34mg/kg，每天1次。于实验第40天处死所有大鼠。检测血清BUN、Scr和尿液β-N-乙酰胺基葡萄糖苷酶(beta-N-acetyl glucosidas，NAG)水平，采用HE染色评定肾小管间质损伤程度，采用Masson染色评定肾小管间质纤维化相对面积，采用SP法免疫组化检测α-SMA和ColⅠ在肾组织中的表达情况。 3.金纳多注射液对顺铂诱导大鼠肾间质纤维化的改善作用的机制: 采用SP法免疫组化检测TGF-β1在肾组织中的表达情况，采用WB检测TGF-β1、p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达情况，采用实时荧光定量PCR检测p38MAPKmRNA的表达。 结果: 1.单次临床剂量顺铂诱导大鼠肾间质纤维化: 与正常组比较，顺铂组各时间点大鼠血清BUN和Scr水平、肾小管间质损伤指数、肾小管间质纤维化相对面积、肾组织的α-SMA、ColⅠ和TGF-β1表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01)。 2.金纳多注射液改善顺铂诱导大鼠肾间质纤维化: 与正常组比较，顺铂组大鼠的血清BUN、Scr和尿液NAG水平、肾小管间质损伤指数、肾小管间质纤维化相对面积、肾组织的α-SMA和ColⅠ表达水平均显著升高(P＜0.01)。与顺铂组比较，金纳多低、中、高剂量组大鼠的血BUN、Scr、和尿液NAG水平、肾小管间质损伤指数、肾小管间质纤维化相对面积、肾组织的α-SMA和ColⅠ表达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。 3.金纳多注射液对顺铂诱导大鼠肾间质纤维化的改善作用的机制: 与正常组比较，顺铂组大鼠肾组织的TGF-β1表达水平、p-p38MAPK与p38MAPK的比值、p38MAPK mRNA的相对表达量均显著升高(P＜0.01)。与顺铂组比较，金纳多低、中、高剂量组大鼠肾组织的TGF-β1表达水平、p-p38MAPK与p38MAPK的比值、p38MAPK mRNA的相对表达量均显著降低(P＜0.05或P＜0.01)。 结论: 1.单次临床剂量顺铂可诱导大鼠肾间质纤维化。 2.金纳多注射液可显著改善顺铂诱导的大鼠肾间质纤维化。 3.金纳多注射液改善顺铂诱导大鼠肾间质纤维化的机制可能与抑制TGF-β1/p38MAPK通路有关。