高效抗逆转录病毒治疗对HIV/HBV共感染者HBV耐药基因突变影响的研究

摘要

目的:自从对HIV感染者/AIDS患者开展高效抗逆转录病毒治疗后，他们的病情得到了有效的控制及缓解。但由于部分抗HIV药物具有抗HIV和抗HBV的双重活性，长期应用将导致HIV/HBV共感染者HBV耐药突变率增高。在对HIV/HBV共感染者治疗前HBV耐药情况不明更成为问题。广西HIV/HBV共感染率在全国排名第一，但其HBV耐药情况报道罕见。本研究的目的是了解高效抗逆转录病毒治疗(HAART)对广西HIV/HBV共感染者HBV耐药突变的影响。
　　方法:收集123例未接受高效抗逆转录病毒治疗的HIV/HBV共感染者（组1）与80例已接受高效抗逆转录病毒治疗的HIV/HBV共感染者（组2）静脉血标本及临床资料。用巢式PCR对所有血清标本HBV DNA聚合酶进行扩增及测序。对HBV聚合酶核苷酸序列对比分析，构建基因进化树，通过单因素及多因素logistic回归模型分析探索耐药突变相关因素。
　　结果:1.一般情况:共有86例HBV DNA聚合酶成功扩增并测序，其中组1占69例，阳性率为56.1％，95％CI:47.3-64.9，组2占17例，阳性率为21.3％，95％CI:12.3-30.30。组1和组2的平均年龄分别为43.6±1.2和37.2±7.3岁。
　　2.耐药突变率:聚合酶逆转录酶区(RT)氨基酸总替换率为50.0％，95％CI:39.40-60.60;其中组1替换率为39.1％，95％CI:27.60-50.60，组2替换率为94.1％，95％CI:82.90-105.30，两组氨基酸替换率差异有统计学意义(x2=16.496，p＜0.050)。HBV总耐药突变率为16.3％，95％CI:8.50-24.10;组1耐药突变率为1.4％，95％CI:-1.4-4.2;组2耐药突变率为76.5％，95％CI:56.3-96.7，组2耐药突变率高于组1，差异有统计学意义(x2=50.955，p＜0.05)。
　　3.耐药突变形式:聚合酶逆转录酶(RT)最常见的耐药突变形式是L180M(85.7％，12/14，95％CI:67.40-104.00)。对拉米夫定耐药的主要突变形式是rtL180M+rtM204I+rtL80I(35.7％，5/14，95％CI:10.60-60.00);对恩替卡韦耐药的主要突变形式是rtM204V+rtL180M(71.4％，10/14，95％CI:47.70-95.10);对替比夫定耐药的主要突变形式是rtM204I+rtL80I(42.9％，6/14，95％CI:17.00-68.80);对拉米夫定耐药者，100％出现替比夫定和恩替卡韦交叉耐药。未发现对替诺福韦耐药的突变。
　　4.基因型与耐药:86例阳性标本中HBV B基因型占57％，95％CI:46.50-67.50;C2基因亚型占20.9％，95％CI:12.30-29.50;C5基因亚型占17.4％，95％CI:9.40-25.40;Ⅰ基因型占4.7％，95％CI:0.20-9.20。C基因型的耐药突变率为33.3％，95％CI:17.20-49.40，B基因型的耐药突变率为6.1％，95％CI:-0.60-12.80，C基因型耐药突变率高于B基因型，差异有统计学意义(x2=10.312，p＜0.050)。
　　5.CD4总计数与耐药:成功测序的研究对象中83例有CD4总计数资料，范围在2～990个/μl，其中位数为219个/μl，CD4细胞计数＞500个/μl组的耐药突变率为53.3％，CD4细胞计数＜500个/μ1组的耐药突变率为8.8％，CD4细胞计数＞500个/μl组的耐药突变率高于CD4细胞计数＜500个/μl组，差异有统计学意义(x2=13.333，p＜0.05)。
　　6.HBeAg与耐药:组1HBeAg阳性率为42.6％，29/68，95％CI:30.80-54.40;组2HBeAg阳性率为92.9％，13/14，95％CI:79.40-106.40，两组间差异有统计学意义(x2=10.082，p＜0.050)。HBeAg阳性者耐药突变率为26.2％，HBeAg阴性者耐药突变率为2.5％，HBeAg阳性者耐药突变率高于HBeAg阴性者，差异有统计学意义（x2=10.439，p＜0.05）。
　　7.抗病毒治疗药物与病毒复制:有5例(6.25％,5/80，95％CI:0.95-11.55)HIV/HBV共感染者HBV病毒载量超过10×106拷贝/mL,其中1例HIV/HBV共感染者治疗方案中含替诺福韦且已治疗4年，另外4例HIV/HBV共感染者对拉夫米定耐药，这4例共感染者中有3例接受高效抗逆转录病毒治疗时间均超过6.5年。接受高效抗逆转录病毒治疗者中有91.2％(73/80，95％CI:85.10-97.40)的患者HBV病毒载量低于检测下限（＜30拷贝/mL）。
　　8.耐药因素分析:通过logistic回归模型分析探索耐药突变的相关因素，单因素分析结果显示性别、基因型、CD4细胞计数、HBeAg/抗-HBe和高效抗逆转录病毒治疗与耐药突变的发生有关，但多因素分析结果显示只有高效抗逆转录病毒治疗与耐药突变发生有关(p=0.0001，OR为195.757，95％CI:14.14-2711.00)。
　　结论:抗HIV治疗可导致HIV/HBV共感染者HBV耐药突变率增高;各种抗HBV药物存在交叉耐药现象，当出现其中一种药物耐药，选择补救药物时应加以注意;替诺福韦不能完全抑制HBV复制，对拉米夫定耐药株使用替诺福韦补救治疗效果有限。

目录

声明

个人简历

主要中英文缩略词表

摘要

前言

1．资料与方法

1．1 研究对象与样本收集

1．2 血清HBV 5项血清学标志物的检测

1．3 CD4 T淋巴细胞计数的检测

1．4 HBV病毒载量的检测

1．5．丙氨酸氨基转移酶ALT的测定

1．6 HBV核酸的提取

1．7 巢式PCR扩增HBV DNA基因

1．8 凝胶电泳的检测

1．9 HBV DNA基因的测序

1．10 生物信息学分析及统计分析

2．结果

2．1 研究对象的一般情况

2．2 耐药突变一般情况

2．3 基因型与耐药突变

2．4 耐药突变形式分析

2．5 CD4细胞计数和HBeAg与HBV耐药突变及免疫逃避突变对比分

2．6 HBV表面抗原基因免疫逃避突变率

2．7 高效抗逆转录病毒治疗对HIV及HBV病毒复制的影响

2．8 与耐药突变基因相关的影响因素

3．讨论

4．创新点

5．结论

参考文献

综述 HIV／HBV共感染者HBV耐药研究进展

致谢

基金项目

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