健脾疏肝降脂方对非酒精性脂肪肝小鼠血脂及肝组织病理学的影响

摘要

目的：观察健脾疏肝降脂方对高脂肪饮食和药物引起的非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型小鼠的影响，并探讨该方的作用机制，为临床应用推广提供有力的证据。
　　方法：72只SPF级昆明种小鼠，给予全价营养饲料喂养1周后，随机分为6组，即正常组，模型对照组，壳脂胶囊组，健脾疏肝降脂方高、中、低剂量组，每组12只，雌雄各半。正常组给予普通饲料，其它各组采用喂高脂饲料和药物诱导建立 NAFLD小鼠模型。同时，除正常组和模型对照组外，各治疗组给予健脾疏肝降脂方水煎液或壳脂胶囊水溶液灌服，正常组和模型组给予等体积的超净水灌服，各组小鼠（除正常组外）在下腹部给予皮下注射10％的CCl4食用油溶液，剂量为0.1mL/10g，每周2次，共持续6周。最后一次治疗后禁食12h，给予10%水合氯醛溶液4mL/kg腹腔内注射麻醉，麻醉成功后，给予腹主动脉穿刺取血，将血样低温下离心分离，检测血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）水平或反应性变化及肝组织游离脂肪酸（FFA）的含量。处死小鼠后，快速剖取肝脏称其湿重，计算肝指数，用0.9%氯化钠溶液冲洗，在肝脏左叶同位置处剪一小块大小适宜的肝组织置于4%多聚甲醛液中固定，给予肝组织石蜡包埋，切片，HE染色，观察组织病理学变化。
　　结果：①模型组与正常组比较，其小鼠肝指数、肝湿重及血清 TG、TC、ALT、AST、LDL及FFA均明显升高，有显著统计学意义（P<0.01）；②与正常组相比，健脾疏肝降脂方高、中剂量组肝指数、肝湿重、TG、TC、ALT、AST、LDL及FFA均无统计学意义（P>0.05）；③与模型组对比，健脾疏肝降脂方高、中、低剂量组和壳脂胶囊组各项指标均明显降低或者减轻，有统计学意义（P<0.05）；④在改善各项指标方面，健脾疏肝降脂方高、中剂量组明显优于壳脂胶囊组及低剂量组，无统计学意义（P>0.05）；⑤光镜下可见：肝小叶结构清晰，中央静脉周围肝细胞呈辐射形式排列，形态一致，大小均匀，未见脂肪变性及坏死、炎性细胞侵润；显微镜下见，模型对照组小鼠肝小叶构造不清楚，肝小叶出现明显损害，肝细胞体积肿胀明显，肝细胞水肿明显，可见肝组织呈弥漫性脂肪变，核增大，细胞索无规律排列，可见由两个及两个以上破裂的肝细胞相互融合，其中又以小叶中央病变严重，大量炎性细胞入侵，有时可见凋亡小体；各治疗组及壳脂胶囊组小鼠肝细胞脂肪变均有不同程度的改善趋势，治疗高、中剂量组和壳脂胶囊组效果好于低剂量组；⑥电镜下可见：正常组肝组织中的超微结构肝细胞内有着丰富的线粒体，线粒体嵴较为丰富，但也可见有少数的脂滴存在，模型组小鼠肝组织中的超微结构肝细胞内有着丰富的线粒体，线粒体嵴几乎消失，但也可见有大量的脂滴存在，和大量的胶原纤维存在，各治疗组及壳脂胶囊组小鼠肝细胞脂肪变均有不同程度的改善趋势，治疗高、中剂量组和壳脂胶囊组效果好于低剂量组。
　　结论：健脾疏肝降脂方对NAFLD小鼠的肝功能、血脂TG、TC、HDL、LDL及肝组织FFA有良好的调节作用，本方能通过促进 NAFLD小鼠病变肝脏细胞的恢复来降低血清转氨酶的活性，减低血脂的含量及 FFA的活性，缩小NAFLD小鼠的肝脏外形及减轻重量，从而改善 NAFLD小鼠肝脏的脂肪变性程度；恢复肝细胞中的线粒体，增强肝细胞的线粒体和增加线粒体嵴的作用，使得肝细胞内产生大量ATP增强其能量代谢，从而使脂肪酸代谢增强，减少脂滴的形成。高、中、低三个剂量组由于计量的关系而疗效差异明显，随着剂量的增加而疗效增加，成正效的比例关系。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 一般情况观察及动物死亡情况

2 各组小鼠肝湿重及肝指数的变化

3 各组小鼠肝组织 FFA的变化

4 小鼠血脂含量的变化

5 各组小鼠血清ALT、AST活性的变化

6 各组小鼠肝组织光镜及电镜的变化

理论探讨

1 中医学对非酒精性脂肪肝的认识

2 导师对非酒精性脂肪肝的认识

3 健脾疏肝降脂方组成及方义分析

4 NAFLD的动物模型选择依据

5 健脾疏肝降脂方治疗非酒精性脂肪肝的可能机理

结论

致谢

参考文献

附录

附录1 文献综述:非酒精性脂肪肝的现代中西医研究进展

附录2 光镜下肝组织病理照片

附录3 电镜下肝细胞内线粒体及脂肪滴病理照片

附录4 英文缩略词表

附录5 在校期间论文论著和科研情况