锁阳总黄酮干预大鼠围绝经期模型的分子机制

摘要

目的:观察锁阳总黄酮对围绝经期大鼠、围绝经期抑郁大鼠模型的影响，分析锁阳总黄酮对围绝经期综合征疾病的作用特点，揭示锁阳总黄酮治疗 PMS的分子机。
　　方法:采用背部开口，一侧卵巢全切、另一侧切除80％的方法复制围绝经期大鼠模型，连续给药35天，分别测定大鼠开场活动（Open field）中的水平运动距离和站立次数；强迫游泳实验中大鼠4min内，2-4min的不动时间；并测定大鼠24h的糖水摄入量。称量并计算大鼠的胸腺、脾脏、子宫湿重及其脏器指数，测定围绝经期大鼠血清中雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）的含量；用免疫组化法测下丘脑、垂体、卵巢、子宫中雌激素受体（ER）表达，下丘脑、垂体中雄激素受体（AR）、凋亡因子 Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达；RT-PC法测下丘脑中ERmRNA的表达。
　　采用背部开口，一侧卵巢全切、另一侧卵巢切除80%并结合慢性刺激的方法复制围绝经期合并抑郁症大鼠模型，给药35天。分别测定大鼠开场活动（Open field）中的水平运动距离和站立次数；强迫游泳实验中大鼠4min内，2-4min的不动时间；并测定大鼠24h的糖水摄入量。称量大鼠的胸腺、脾脏、子宫湿重并计算其脏器指数，测定围绝经期合并抑郁模型大鼠血清中雌二醇（E2）、睾酮（T）、促性腺激素释放激素（GnRH）、促黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、白介素-2（IL-2）、骨钙素（BGP）的含量；血浆中β-内啡肽（β-EP）的含量；脑组织匀浆液中5羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）的含量；用免疫组化法测下丘脑、垂体、卵巢、子宫中雌激素受体（ER）的表达，下丘脑、垂体中雄激素受体（AR）、凋亡因子Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达；RT-PC法测下丘脑中ERmRNA的表达。
　　结果:以左侧卵巢全摘，右侧卵巢摘除80%造大鼠围绝经期模型。模型复制成功，模型组大鼠水平运动距离，站立次数、糖水消耗量、子宫、胸腺、脾脏指数、血清 E2水平均显著下降；强迫游泳不动时间延长，血清 FSH、LH水平显著升高；下丘脑、垂体中AR的表达，下丘脑、垂体、子宫、卵巢中ER的表达均显著降低，下丘脑、垂体中Bcl-2的表达显著降低，Bax的表达显著升高，下丘脑 ERmRNA的表达显著降低。锁阳总黄酮能改善围绝经期模型大鼠的行为学指标，能明显或显著的提高其子宫、胸腺、脾脏指数和血清 E2的水平，并明显或显著降低血清 FSH、LH的水平；显著或明显升高下丘脑、垂体中AR的阳性表达，下丘脑、垂体、子宫、卵巢中ER的阳性表达量；显著或明显升高下丘脑和垂体中Bcl-2表达，降低 Bax的表达；显著或明显升高下丘脑 ERmRNA的表达。
　　以左侧卵巢全摘，右侧卵巢摘除80%合并慢性不可预见应激性刺激造大鼠围绝经期合并抑郁模型。模型复制成功，模型组大鼠水平运动距离，站立次数、糖水消耗量、子宫、胸腺、脾脏指数、血清 E2、T、BGP、IL-2、β-EP水平均显著下降；脑匀浆液中的NE、5-HT、DA的水平均显著下降；强迫游泳不动时间延长，血清FSH、LH、GnRH水平显著升高；下丘脑、垂体中AR的表达，下丘脑、垂体、子宫、卵巢中ER的表达均显著降低，下丘脑、垂体中Bcl-2的表达降低，Bax的表达升高，下丘脑 ERmRNA的表达显著降低。锁阳总黄酮能显著改善围绝经期抑郁模型大鼠的行为学指标；能明显或显著的提高其子宫、胸腺、脾脏指数；明显或显著升高围绝经期抑郁大鼠血清 E2、T、IL-2、β-EP、BGP的水平；明显或显著的提高围绝经期抑郁大鼠脑匀浆液中的5-HT、DA的水平，并降低血清 GnRH、FSH、LH的水平；显著或明显升高围绝经期抑郁大鼠下丘脑、垂体中AR的表达，下丘脑、垂体、子宫、卵巢中ER的表达量；显著或明显围绝经期抑郁大鼠升高下丘脑和垂体中Bcl-2表达，降低 Bax的表达；显著或明显升高下丘脑 ERmRNA的表达。
　　结论:锁阳总黄酮通过升高E2来调节下丘脑-垂体-性腺轴，使与之相关的LH、FSH、GnRH、BGP、IL-2、5-HT、DA、ER、AR等趋于正常，从而缓解围绝经期征以及围绝经期合并抑郁症出现的各种症状；这可能与锁阳总黄酮对Bcl-2和Bax的调节有关。

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前言

实验1 锁阳总黄酮对大鼠围绝经期模型的影响

材料与方法

结果

实验2 锁阳总黄酮对大鼠围绝经期抑郁模型的影响

材料与方法

结果

讨论

1对围绝经期综合征的认识

2锁阳总黄酮对围绝经期的作用研究

3围绝经期综合征模型及围绝经期抑郁模型的选择

4检测指标的意义

5锁阳总黄酮对大鼠围绝经期模型及大鼠围绝经期抑郁模型的影响

6.本实验治疗围绝经期的机制探讨

结论

致谢

参考文献

附录

附录1 免疫组化切片

附录2 文章综述: 中药活性部位防治围绝经期综合症特点分析