金花茶遗传多样性和居群遗传结构的ISSR，RAPD和AFLP分析

摘要

本研究针对目前金花茶缺乏有关遗传多样性方面研究的现状，运用ISSR、RAPD和AFLP三种分子标记方法，选取了金花茶在中国分布区的6个自然居群，通过对金花茶自然居群的遗传多样性研究，揭示金花茶物种的遗传多样性水平和金花茶居群的遗传变异和遗传结构，从保护生物学角度为制定科学有效的金花茶保护措施，合理开发和有效利用金花茶资源提供科学的指导和依据。本研究获得以下结果：　　1.应用ISSR、RAPD和AFLP三种分子标记方法揭示了金花茶物种的遗传多样性水平。三种分子标记的数值相差不大，均揭示了金花茶物种具有较高的遗传多样性水平。ISSR、RAPD和AFLP都是评估金花茶遗传多样性水平有效的分子标记方法。　　2.Nei's遗传多样性分析和AMOVA分析所揭示的金花茶6个自然居群间的遗传分化水平表明，各居群间存在较大的遗传分化。遗传变异主要存在于居群间(Gst值：ISSR：0.5752，RAPD：0.6140，AFLP：0.4950)。金花茶两个间断分布地区内的各个居群间有一定的基因交流，然而在两个间断分布地区间的基因交流却有限，产生了一定的遗传分化。Mantel检验显示遗传距离和地理距离呈显著的正相关(r=0.9399，p=0.0490＜0.05)。此遗传分化结构可能与生境片断化引起的基因流有限有关。6个金花茶自然居群的120个样品的单株UPGMA聚类分析结果发现，各样品相互独立各自分开，来自同一居群的样品能聚在一起，同样来自同一间断分布地区的居群也各自聚在一起，UPGMA聚类图能清晰客观地反映每个个体之间、居群之间以及两间断分布地区间的遗传关系。　　3.只要让金花茶居群保持自然的更新演替，自然的金花茶是能够在自然界中继续生存发展下去的，建议对金花茶自然居群的保护以就地保护为主，并且保护好尽可能多的金花茶居群。

目录

文摘

英文文摘

第一章综述

1.1前言

1.2金花茶的研究概况

1.2.1金花茶的地理分布和生境类型

1.2.2金花茶的核型

1.2.3金花茶的花粉形态

1.2.4金花茶的应用

1.2.5金花茶的杂交育种

1.2.6小结

1.3遗传多样性的概念和研究方法

1.3.1遗传多样性的概念

1.3.2研究遗传多样性的意义

1.3.3遗传多样性的研究方法

1.3.4 DNA分子标记

1.3.5选择合适的遗传多样性研究方法

1.4本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1植物材料

2.1.1叶片组织的采集利保存

2.1.2 DNA的提取和纯化

2.1.3 DNA质量的检测

2.2 ISSR-PCR分析

2.3 RAPD-PCR分析

2.3.1 RAPD-PCR反应条件的优化

2.3.2确定反应体系和反应程序

2.3.3 RAPD引物筛选

2.3.4 RAPD-PCR反应产物检测

2.4 AFLP-PCR分析

2.4.1 AFLP-PCR实验流程

2.4.2 AFLP产物检测

2.5数据统计及分析方法

2.5.1数据统计方法

2.5.2采用的分析软件

第三章结果与分析

3.1基因组DNA质量

3.2 RAPD结果

3.2.1 RAPD反应体系的建立

3.2.2 RAPD引物筛选

3.2.3 RAPD扩增结果

3.2.4金花茶的遗传多样性

3.2.5金花茶居群的遗传结构和遗传分化

3.2.6金花茶居群的聚类分析

3.3 AFLP结果

3.3.1酶切、连接与预扩增

3.3.2选择性扩增结果

3.3.3金花茶的遗传多样性

3.3.4金花茶居群的遗传结构和遗传分化

3.3.5金花茶居群的聚类分析

3.4 RAPD和AFLP的比较与综合分析

3.4.1 RAPD和AFLP分析比较

3.4.2金花茶的遗传多样性

3.4.3金花茶居群的遗传结构和遗传分化

3.4.4金花茶居群的聚类分析

3.4.5金花茶个体的聚类分析

第四章讨论

4.1基因组DNA的提取

4.2 RAPD分析的稳定性和条件优化

4.3 AFLP分析应注意的问题

4.4金花茶的遗传多样性

4.4.1金花茶的遗传多样性水平

4.4.2金花茶居群的遗传结构和遗传分化

4.5保护生物学上的意义

参考文献

致谢

附录