我国片形吸虫核糖体DNA及线粒体DNA多态性的研究

摘要

该文对来自中国广西、四川、贵州、江苏、甘肃、黑龙江等省的不同宿主的76株片形吸虫进行核糖体DNA和线粒体DNA多态性的研究,用法国的肝片吸虫做对照样本,并将测序结果与GenBank<'TM>中已发表的片形吸虫DNA序列进行比较,旨在从基因水平上明确中国片形吸虫的遗传变异水平.根据Huang等发表的片形吸虫核糖体DNA(rDNA)的第二内转录间隔区(ITS-2)序列,设计两对特异性引物,优化PCR反应条件,建立特异PCR方法来鉴别片形吸虫的种类,并评价此方法的特异性和敏感性.结果76株片形吸虫经特异PCR鉴定被分为三

目录

本论文常用英文缩写

综述部分 片形吸虫遗传变异及分子分类的研究进展

前言

1.染色体分析

2.生物化学分析

2.1同工酶多态性

2.2可溶性蛋白图谱

3.分子遗传学分析

3.1限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)

3.2聚合酶链式反应-限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)

3.3随机扩增多态性DNA分析(RAPD)

3.4单链构象多态性分析(SSCP)

3.5 DNA序列分析

3.6研究中所用特定基因的选取

4结语

参考文献

研究一 片形吸虫种类特异PCR方法的建立

摘要

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1 PCR实验条件的优化

2.2 PCR扩增

2.3测序结果

2.4序列分析结果

2.5特异性实验

2.6敏感性实验

3讨论

3.1特异性引物的设计问题

3.2 PCR实验条件的优化

3.3片形吸虫的分类问题

研究二 片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究

摘要

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1 ITS-1部分序列的PCR扩增

2.2 PCR-SSCP分析

2.3 ITS-1全序列的的PCR扩增

2.4序列结果

2.5序列分析

3讨论

3.1 PCR-SSCP的影响因素

3.2 ITS-1基因的多态性

研究三 我国片形吸虫线粒体基因组部分序列多态性的研究

摘要

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1 PCR扩增

2.2 SSCP分析

2.3 pnad1基因克隆及鉴定

2.4测序结果

2.5序列分析结果

3讨论

3.1测序结果的分析

3.2本项研究与其它国家片形吸虫研究的比较

3.3 PCR-SSCP的敏感性

参考文献

结论

附图

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文和参加的学术活动情况