食蟹猴等猴类微卫星DNA及性别决定基因的初步研究

摘要

本研究共进行了两大部分的试验。 试验一旨在探讨食蟹猴、恒河猴等猴类微卫星的特性和应用，为它们遗传资源的合理利用和保护提供科学依据。 微卫星筛选标准是：7次以上重复的双碱基重复序列或5次以上重复的三碱基重复序列。在筛选的微卫星DNA中挑选5条微卫星序列设计了引物，等位基因的数目从5到11不等，等位基因的大小分布在150bp到320bp之间，5个微卫星位点的电泳及测序结果提示这些微卫星位点在食蟹猴等猴类中均具有较高的多态性等信息，它们的扩增条件和分离步骤都比较方便简捷，可以认为其中的4～5个微卫星位点可适用于遗传学分析。 使用2.0～3.5％琼脂糖凝胶65～100v电压2.5～5小时电泳可以较好的分离出差异较大的杂合体等位微卫星基因；肉眼可以从琼脂糖凝胶上粗略的分辨出杂合体微卫星碱基数量上存在差异；分离的微卫星等位基因可以回收得到分离的等位微卫星DNA，回收产物进行了测序等分析。 测序结果表明，有些微卫星的重复序列可以出现很复杂的“复合型”结构。微卫星亲子鉴定的初步试验表明，利用微卫星的琼脂糖电泳结合测序分析，能大概的鉴定出个体之间的亲缘关系。微卫星等位基因遵循分离的孟德尔遗传规律。 试验二是以食蟹猴、恒河猴、一种杂交猴基因组DNA为实验材料，利用PCR(Polymerse Chain Reaction)技术扩增食蟹猴SRY基因序列并进行分析。 参照GENBANK上公布的一些与猕猴类相关的SRY基因序列，设计引物，对所拥有的三种猴的基因组DNA进行扩增，在雄性个体样品均得到200bp的HMG-box核心基因片段及约。750bp的含HMG-box核心的扩展片段，而雌性猴中均未扩增出上述产物，说明SRY基因为雄性特异。扩增的基因片段连接到PMD-18T载体，转化到DH5 α大肠杆菌中，获得重组子，亚克隆后进行测序和生物信息学分析。分析结果表明此三种猕猴属动物SRY基因的种内同源性为99[％]-100[％]， HMG-box核心区的同源性则几乎为100[％]。BLAST结果亦提示食蟹猴、，恒河猴、一种杂交猴的SRY基因与人的SRY基因存在着较高的同源性，达到93～100[％]。表明灵长类动物SRY基因的核心区及其核心扩展区的碱基序列具有高度的同源性和进化保守性。

目录

文摘

英文文摘

第一部分文献综述第一章动物的遗传多样性研究及微卫星标记

第一部分文献综述第二章动物性别决定基因的研究进展

第二部分实验研究第三章微卫星技术在食蟹猴、恒河猴等猴类生物多态性和亲缘关系鉴定上的应用的初步研究

第二部分实验研究第四章食蟹猴、恒河猴、一种杂交猴SRY基因的初步研究

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况