我国部分省区鸡传染性法氏囊病病毒分离株的分子流行病学研究

摘要

鸡传染性法氏囊病是由鸡传染性法氏囊病病毒引起的一种急性、高度接触性传染病。病毒主要侵害雏鸡法氏囊等免疫器官中未成熟的B淋巴细胞或B淋巴前体细胞，使鸡群产生严重、长期的免疫抑制，从而对其它病毒性或细菌性继发感染的敏感性增加，对各种疫苗应答下降，甚至引起免疫失败，给养禽业造成巨大的经济损失。 为了解目前我国养鸡生产上IBDV的流行情况及其分子流行病学的特征，应用实验室已建立的逆转录酶一聚合酶链式反应(reversetranscriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)技术，对2003.9～2006.3期间收集于广西(包括南宁、北海、玉林)、江苏、浙江、安徽各地的临床疑似传染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)病鸡的法氏囊组织、骨髓和脾脏等器官进行检测；对检测呈阳性的病料采用9～1l天龄的鸡胚通过绒毛尿囊膜(chorio-allantoic membrane，CAM)或鸡胚成纤维细胞接种的方法进行鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)的分离和传代(2～3代)；对致死的鸡胚或出现细胞病变的细胞分别取其尿囊液和收获细胞毒进行常规的细菌检查和血凝试验(HA)，阴性者取其CAM和收获的细胞毒进行IBDV的RT-PCR鉴定。结果证实并成功分离到20株IBDV；采用SacI和Sac I两个特异性核酸内切酶对分离株的VP2基因高变区(vVP2)进行酶切分析，结果有10株只有Ssp I酶位点而无Sac I酶位点，属于超强毒株(vvlBDV)，另外10株则只有Sac I酶而无Ssp I酶位点，属于经典毒株(cIBDV)。本研究的结果证实，IBDV的感染广泛存在于商业鸡群中，而且流行的毒株属vvIBDV和clBDV，而未发现变异株的存在。 为了解现场流行毒株的关键基因的遗传变异情况，研究应用RT-PCR技术对分离自广西、江苏、浙江、安徽四个省的22个IBDV分离株以及5株中等和中等偏强毒力商品疫苗株B87(in)、B87(BJ)、FW2512、Bursine-2、YSLMB的VP2基因高变区(vVP2)进行扩增及其核苷酸序列的测定，将获得的序列与其它vvIBDV参考毒株DV86、UK661、OKYM、HK46、GX、GX8／99、JS30-99、SDl-97、ZJ2000，cIBDV参考毒株STC，中等毒力株MB、Bur-706，弱毒疫苗株B87、Cul以及变异株GLS进行核苷酸及其推导的氨基酸序列差异的比较分析，并绘制其遗传系谱树。结果发现，根据病毒vVP2内关键位点氨基酸的特征可将22个分离株分为3类：第1类属于vvIBDV，包括BH09、BH11、JS1、JS7、YY1、YY6、YL051、050222、TSC-2(9)、Tz③共10株；第2类属于中等偏强毒力株，包括040124、YL052两株；第3类属于弱毒疫苗株，有020180、YLZF2、040131、BH15、YY2、050045、050057、050258、TSC-1(3)、A038共10株；核苷酸同源性的比较发现，10株vvIBDV分离株与日本vvlBDV毒株OKYM、中国株JS30-99和欧洲vvlBDV毒株DV86的同源性高达96.5％～99.1％，而与clBDV参考毒株STC、弱毒株和变异株GLS的核苷酸同源性分别仅有90.7％～95.6％、91.8％～94.3％、87.8％～89.7％；2株中等毒力分离株与B87(in)、FW2512的同源性高达100％；10株属于弱毒的分离株与弱毒疫苗株B87、CU1的同源性高达为98.3％～100％；绘制的遗传系谱树显示，22个IBDV分离株可明显分为2群：第1群包括属于vvIBDV的10个分离株和1株IBDV中等偏强毒力商品疫苗株YSLMB，与JS30-99、OKYM、DV86和UK661同在一个分支上;第2群包括12个毒力中等及中等偏强毒株以及弱毒株，与CU1、B87、FW2512、Bursine-2则同在另一分支上；所有分离株VP2基因高变区的核苷酸及其推导的氨基酸缺乏时间和地域上的明显差异。研究的结果表明，近年来我国部分省区IBDV现场流行毒株主要以vvIBDV为主，毒株间VP2基因高变区序列的同源性比较高，与欧洲、日本分离株的也较高。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章传染性法氏囊病病毒的分子生物学研究进展

第二章IBDV现场流行株的分离及其致病型鉴定

第三章IBDV分离株VP2基因高变区(vVP2)序列的测定与比较分析

结论

致谢

个人简历

攻读硕士学位期间参与的科研项目及论文发表情况