不同培养液成分及培养系统对水牛体外受精早期胚胎发育的影响

摘要

本试验研究的主要内容是探讨不同的添加物及培养系统对水牛早期胚胎体外发育的影响，通过这些影响胚胎体外发育的重要因素的研究，确定合适的添加浓度，为不断改善牛早期胚胎培养液组分及培养系统提供科学的依据。抽取来自屠宰场水牛卵巢表面直径为2～6mm卯泡的卵母细胞，在体外成熟培养后与水牛精子进行体外受精(IVF)，受精后18 h将假定受精的卵子移入添加有不同成分的培养系统进行培养，受精后2 d检查分裂率，5～9 d检查囊胚发育率；所得囊胚分别进行冷冻，观察其解冻后囊胚的孵化能力；用Hoechst33342进行染色，检查其细胞数；进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，进行胚胎蛋白质组分差异分析。结果发现：1)在TCM-199培养液中添加的胰岛素浓度为5μg／mL时，水牛早期胚胎的囊胚发育率，囊胚细胞数及冷冻-解冻后胚胎的孵化率都显著高于对照组及其他浓度组(P<0.05)；2)不管在受精后18 h还是96 h在TCM-99培养液中加入葡萄糖，当浓度大于6 mM时显著影响水牛早期胚胎发育到囊胚及孵化囊胚的阶段(P<0.05)；3)在TCM-199培养液中联合添加胰岛素和葡萄糖时能显著提高水牛早期胚胎的孵化囊胚率、总囊胚率和囊胚细胞数(P0.05)，对胚胎蛋白质组分的表达没有影响；6)水牛胚胎分别在以颗粒细胞和输卯管上皮细胞为共培养系统中培养时，其囊胚发育率，囊胚细胞数及冷冻-解冻后胚深入研究提供参考，同时也为五杆机构的非线性分析等后续工作打下基础。

目录

文摘

英文文摘

第一章哺乳动物体外受精早期胚胎培养及相关问题研究进展(综述部分)

第二章不同培养系统及培养液成分对水牛体外受精早期胚胎体外发育的影响(试验部分)

参考文献

附录

图片与说明

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文