猪卵母细胞体外受精和孤雌激活的初步研究

摘要

对猪卵母细胞体外受精(IVF)和孤雌激活(PA)的研究，有助于揭示卵母细胞活化机制和受精机理，为优化早期胚胎体外生产系统提供理论依据。体外成熟42-46h的猪卵母细胞，与最终浓度为1×106个/ml的精液共孵育6h，或用Ionomycin(5min)+6-DMAP(4h)联合激活，最后在胚胎培养液NCSU-23中进行体外培养，48h后检查卵裂率，第168h记录囊胚发育情况。结果发现： 1)本研究选用的TL-Hepes液、DPBS液、TCM-199(Ⅰ)液和TCM-199(Ⅱ)液作为洗卯液，猪卵母细胞在体外成熟培养42-46h后的核成熟率分别为：57.35％、58.11％、58.11％和57.81％，体外受精后第48小时卵裂率分别为：70.82％、71.35％、74.92％和73.79％，第168小时囊胚率分别为：5.16％、4.62％、4.85％和5.02％，核成熟率之间、卵裂率之间、囊胚率之间均无显著差异(P>0.05)。说明四种洗卵液均可用于猪卵母细胞的洗涤，但从配制及价格上考虑，DPBS液是最佳选择。 2)成熟液中添加8.巯基乙醇(10、50μmol/L)对猪卵母细胞IVF或PA后胚胎体外发育没有明显的促进作用，当浓度达到250μ/mol/L时卵裂率和囊胚率明显下降[0、10、50μmol/L组和250μmol/L组经IVF后卵裂率分别为：59％、59.55％、61.06％vs.50.86％，p<0.05；囊胚率分别为：5.86％、6.36％、6.19％vs.3.02％，p<0.05。经PA后卵裂率分别为：79.43％、79.25％、78.13％vs.66.35％，p<0.05；囊胚率分别为：19.62％、20.28％、18.30％vs.9.62％；p<0.05]。 3)受精液中添加B.巯基乙醇(2、10、5μmol/L)对猪卵母细胞IVF后的早期胚胎发育没有明显的促进作用，当浓度达到250μmol/L时卵裂率和囊胚率明显下降[0、2、10、5μmol/L组和250μmol/L组的卵裂率分别为：78.26％、75.68％、77.88％、74.11％VS.55.08％，p<0.05；囊胚率分别为：6.01％、6.38、6.49％、5.65％vs.1.71％，p<0.05]。 4)受精液中添加BSA(0.1-0.8％BSA)对猪卵母细胞IVF后胚胎体外发育可能具有促进作用(各试验组与对照组的囊胚率分别为：1.76％、3.20％、3.60％、3.52％vs.0.40％；p=0.07)，但其效果有待进一步验证。 5)在受精液中添加咖啡因(1、2、4mM)对猪卵母细胞的IVF及早期发育与对照组相比没有明显提高的效果[各试验组与对照组的囊胚率分别为：1.51％、1.81％、1.52％vs.2.45％；p>0.05]。 6)无极体卵母细胞经IVF或PA后也可以发育至囊胚阶段，但发育能力比有极体的卵母细胞差[经IVF后卵裂率分别为：55.40％vs.62.19％，p>0.05；囊胚率分别为：2.33％vs.4.87％，p<0.05。经PA后卵裂率分别为：64.81％vs.75.45％，p<0.05；囊胚率分别为：12.96％vs.24.54％：p<0.05]。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分文献综述

第一章猪卵母细胞体外受精和孤雌激活研究进展

1.引言

2.猪卵母细胞体外受精研究进展

3.孤雌激活的研究

4小结

第二部分试验研究

第二章洗卵液种类、成熟液中β-巯基乙醇及卵母细胞有极体与否对猪卵母细胞体外受精后进一步早期发育的影响

摘要

1.前言

2.材料和方法

3.结果

4.讨论

5.结论

第三章受精液中添加β-巯基乙醇、BSA和咖啡因对猪卵母细胞的体外受精及进一步早期发育的影响

摘要

1.前言

2.材料和方法

3.结果

4.讨论

5.结论

第四章卵母细胞核成熟与否和成熟液中β-巯基乙醇对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育影响

摘要

1前言

2材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

第五章总讨论

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况