施用甘蔗糖厂酒精废液对蔗田微生物多样性的影响

摘要

为了探明施用甘蔗糖厂酒精废液对土壤生物群落的影响，为科学施用甘蔗糖厂酒精废液提供科学依据，本研究利用传统的分离培养方法及PCR-DGGE分子标记技术，对在不同甘蔗糖厂酒精废液处理条件下甘蔗各个生育时期的蔗田微生物数量及成熟期微生物群落DNA序列进行了分析，得到不同处理条件下的土壤微生物数量和DNA序列的多样性之间的差异，并对影响土壤微生物群落的因素进行了探讨。 本研究获得的主要结论如下： 1．在甘蔗生育期内，施用酒精废液的处理土壤中细菌、真菌、放线菌及微生物总数均比不施酒精废液的处理有明显增加。 2．比较了两种不同的土壤DNA提取方法，发现直接法的提取效率较高，且产量也高，为后期试验提供良好的DNA模板。 3．对目的基因的PCR扩增进行了优化，由于采用特殊的带有“GC夹板”结构的引物，所以分别采用常规PCR及降落式PCR对16S-rDNA V3区进行扩增，结果显示，降落式PCR方法在扩增中具有明显的优势，不但提高了对目的产物扩增的特异性，同时也使产量得以提高。 4．土壤微生物物种丰富度次序由高到低的顺序为：75t/ha酒精废液>105t/ha酒精废液>45t/ha酒精废液>CK2>CK1>75t/ha酒精废液＋不种处理，各处理土壤间微生物群落相似性指数以45t/ha与75t/ha酒精废液处理的最高，达41％；75t/ha酒精废液＋不种与CK2、CK1与105t/ha酒精废液处理之间的最低，为19％。UPGMA聚类也显示了类似的结果，75t/ha和45t/ha酒精废液的处理相似性达75％。 5．施用酒精废液处理对蔗田土壤微生物的影响总体上是有利的，可使蔗田土壤细菌多样性更丰富，数量更多，有利于改良土壤结果，提高土壤肥力。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1国内外研究进展

1.1.1土壤微生物多样性的研究进展

1.1.2土壤微生物多样性研究方法进展

1.1.3 DGGE技术

1.2研究的目的及意义

2材料与方法

2.1试验方案

2.1.1研究内容

2.1.2技术路线

2.2材料

2.2.1试验处理

2.2.2土壤样品采集

2.2.3仪器设备及药品

2.2.4计数用培养基

2.3方法

2.3.1水分测定

2.3.2稀释平板法分离微生物

2.3.3土壤微生物总DNA的抽提

2.3.4不同方法所得粗提DNA质量与纯度的检测

2.3.5 DNA的纯化

2.3.6不同提取方法对后期试验适用性分析

2.3.7 GC夹引物PCR扩增方法的优化

2.3.8琼脂糖凝胶电泳检测

2.3.9 DGGE电泳检测

2.3.10结果计算

3结果与分析

3.1蔗田不同处理条件下微生物类群的数量变化

3.1.1不同处理条件下蔗田微生物总量的变化

3.1.2不同时期不同处理条件下细菌数量的变化

3.1.3不同时期不同处理条件下放线菌数量的变化

3.1.4不同时期不同处理条件下真菌数量的变化

3.2蔗田不同处理条件下微生物类群的多样性变化

3.2.1 DNA的提取及纯化

3.2.2 GC夹引物PCR扩增方法的优化

3.2.3 DGGE的结果和分析

4讨论

5结论

6展望

致 谢

参考文献

附录：