艾纳香的组织培养及挥发油主要化学成分的GC-MS分析

摘要

本文以艾纳香带腋芽茎段为外植体，进行丛生芽诱导、丛生芽增殖、试管苗生根及移栽，组培植株、栽培植株挥发油提取和主要化学成分分析等试验。确定艾纳香快速繁殖的最适条件，为艾纳香种苗的工厂化生产提供技术基础。试验结果如下： 1．丛生芽的诱导将带有腋芽的茎段，接种于MS附加不同浓度的BA、NAA培养基上，诱导产生丛生芽的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L，诱导率可达100％，平均出芽数为15个。 2．丛生芽的增殖将诱导出的丛芽，分离并切成带有2-3个小芽的小束丛芽，接种于MS附加不同浓度的BA、NAA培养基上。丛芽增殖继代培养以MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L为宜。 3．生根培养 将高3-4cm生长健壮的芽苗单个切下，转入1/2 MS附加不同浓度的NAA培养基上，生根较适宜培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg/L。 4.移栽 组培苗的移栽分4个步骤：沙床准备、炼苗、假植和移栽到大田，移栽成活率80.87％。 5.挥发油提取分别取一年生的组培植株和栽培植株下中部叶片、花采用水蒸汽蒸馏法，获得具有特殊香味的黄色挥发油和结晶混合物，分出结晶用于气相色谱-质谱分析。组培植株下部、中部叶片得油率分别为6.68％、4.26％，栽培植株下部、中部叶片得油率分别为11.29％、9.27％，组培植株花的得油率1.19％。试验证明艾纳香的挥发油主要来自于叶片，花的含量很少，栽培植株得油率均高于组培植株。 6.挥发油化学成分GC-MS利用GC-MS对挥发油的主要化学成分进行分离鉴定，并运用气相色谱峰面积归一化法确定各主要组分的相对百分含量，结合质谱数据确定化合物的结构。组培植株下部叶片挥发油GC-MS分离出8个化合物，主要成分为：樟脑(68.41％)、龙脑(17.19％)；野生栽培植株下部叶片挥发油GC-MS分离出10个化合物，主要成分为：樟脑(6.637％)、龙脑(46.737％)；组培植株顶部花挥发油GC-MS分离出8个化合物，主要成分为：樟脑(11.13％)。组织培养技术所生产的艾纳香主要含有樟脑、龙脑等成分，与栽培艾纳香所含成分没有显著差异，但在相对含量上有较大差异。因此组培艾纳香是否能够真正代替栽培艾纳香用于临床还需要进一步的试验进行验证。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1概述

1.2艾纳香的国内外研究进展

1.2.1艾纳香属生物学特性及分布

1.2.2艾纳香的生活史

1.2.3艾纳香的繁殖方式

1.2.4艾纳香的药用价值

1.2.5艾纳香属植物的化学成分

1.2.6分析定量方法

1.2.7艾纳香药理作用研究

1.3本研究目的和内容

1.4本研究的意义

2材料与方法

2.1.试验材料

2.1.1外植体材料

2.1.2提取挥发油的试验材料

2.1.3其它试验材料

2.1.4挥发油分析仪器和药品

2.2试验方法

2.2.1无菌材料的获得

2.2.2丛生芽的诱导

2.2.3丛生芽的增殖

2.2.4生根培养

2.2.5移栽试验

2.2.6培养基及培养条件

2.3挥发油提取分离和分析方法

2.3.1提取分离方法

2.3.2挥发油分析方法

3结果与分析

3.1丛生芽的诱导

3.1.1 6-BA对从生芽诱导的影响

3.1.2 6-BA和NAA对从生芽诱导的影响

3.2丛生芽的增殖

3.3生根培养

3.4移栽

3.4.1沙床的准备

3.4.2炼苗

3.4.3假植

3.4.4移栽

3.5挥发油的提取

3.6挥发油的GC-MS分析

3.6.1组培植株下部叶片挥发油化学成分分析

3.6.2野生栽培植株下部叶片挥发油化学成分分析

3.6.3组培植株花挥发油化学成分分析

3.6.4组培苗叶片和野生苗叶片挥发油主要成分比较

4小结与讨论

4.1小结

4.1.1丛生芽的诱导

4.1.2丛生芽的增殖

4.1.3生根培养

4.1.4移栽

4.1.5挥发油提取分离

4.1.6挥发油GC-MS分析

4.2讨论

4.2.1增殖培养中组培苗的玻璃化现象

4.2.2继代代数对丛生芽增值的影响

4.2.3影响艾纳香移栽成活率的因素

4.2.4影响艾纳香挥发油得油率的因素

4.2.5影响艾纳香挥发油化学成分相对含量的因素

致 谢

参考文献

附录:在攻读硕士学位期间科研活动和发表论文情况