食蟹猴耳部成纤维细胞体外培养和增殖的初步研究

摘要

本论文选取了非人灵长类动物--食蟹猴为研究对象，采用组织块贴壁培养法，构建了食蟹猴耳部组织成纤维细胞的体外培养体系，并对其生长特性进行了研究。在建立培养体系的基础上，运用MTT比色法分析了不同浓度表皮生长因子(EGF)、胰岛素(Insulin)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对5％和10％两种血清浓度下培养细胞增殖能力的影响。 研究结果如下： 1、采用组织块培养法可以获得食蟹猴耳部原代培养物。 2、用0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化液消化细胞、用含有10％FBS的DMEM对细胞进行培养，细胞在体外传至第25代。3～5次传代后，培养细胞逐渐纯化，为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形。细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势。 3、用含10％FBS和10％DMSO的DMEM为冷冻液，采取手工冷冻法对细胞进行冷冻保存，冻存浓度为5×106个/ml。通过台盼蓝染色法对不同代数细胞冻存前后活率进行测定，结果发现虽然复苏后存活率有所下降，但均保持在90％以上，传代后细胞形态和生长速度没有明显变化。 4、绘制的细胞生长曲线呈“S”型，细胞生长经历了潜伏期、指数生长期和停滞期，符合体外细胞生长规律。 5、对第10、15、20和25代细胞的染色体倍性进行分析，发现二倍体染色体数为2n=42。虽然随着传代次数的增加，二倍体细胞所占比例有所下降，但仍在80％以上，且四代之间无显著差异。 6、当培养液中血清浓度为5％时，分别添加20～80 ng/ml的EGF、1、5μg/ml的胰岛素、50～100 ng/ml浓度的IGF-I可显著促进细胞增殖。 7、当培养液中血清浓度为10％时，分别添加10～40 ng/ml的EGF、10、15μg/ml的胰岛素、25～100 ng/ml浓度范围内的IGF-I可显著促进细胞增殖。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分文献综述

前言

1动物细胞体外培养简史

2动物细胞体外培养的主要环节

2.1原代细胞的获得及培养

2.2传代培养

2.3细胞的冻存和复苏

3细胞在体外的生长过程

3.1细胞体外培养的整个生长过程

3.2细胞在体外培养一代内的生长过程

4影响动物细胞体外生长的因素

4.1培养基对细胞生长的影响

4.2物理化学因素的影响

4.3微生物污染

4.4其他因素

5本试验研究的目的和意义

第二部分试验研究

第一章食蟹猴耳部成纤维细胞体外培养体系的初步建立

第一节前言

第二节材料和方法

第三节结果与分析

第四节讨论

第五节小结

第二章EGF、Insulin和IGF-I对体外培养的食蟹猴耳部成纤维细胞增殖的影响

第一节前言

第二节材料和方法

第三节结果与分析

第四节讨论

第五节小结

第三部分总结和结论

参考文献

附录

附图

致谢

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