广西铁皮石斛HPLC指纹图谱及几种化学成分研究

摘要

铁皮石斛是广西道地的珍稀药材，具有极高的药用价值。但由于其生境特殊，加上人为过度采挖，其资源已濒临灭绝，且品种在市场上非常混乱，常被其他低价石斛或野生草木冒充，影响了药材质量。目前，有关铁皮石斛质量标准方面的研究报道较少。本研究旨在采用高效液相色谱法(HPLC)对广西道地药材铁皮石斛色谱指纹图谱进行系统的初步研究，建立铁皮石斛药材对照指纹图谱，同时测定各石斛材料的多糖、氨基酸和蛋白质含量，为铁皮石斛质量标准研究提供一定的参考，同时也为铁皮石斛植物药的开发应用提供理论依据。试验结果如下：
　　 1、对色谱条件和最佳供试品溶液的制备方法进行选择与优化，确定以甲醇为提取溶剂，加入适量10％氨水润湿后，进行水浴回流提取4h，旋转蒸发至干后，用甲醇溶解并定容的制备方法；
　　 2、在以AlltimaC18（4.6mm×250mm，5μm）为固定相，乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速1.2mL/min，柱温30℃，310nm波长处进行检测，获得了13批铁皮石斛药材的HPLC色谱图，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对其进行评价；
　　 3、结果确定了由13个共有峰构成的铁皮石斛药材对照指纹图谱，有11批药材相似度均在0.8以上，2批的相似度较差，未达到0.8；
　　 4、所建立的对照指纹图谱具有好的专属性、稳定性和重现性，且能反映不同产地、不同生育期、不同部位药材的差异。对栽培铁皮石斛不同部位药材进行指纹图谱研究，通过对色谱峰峰面积的比较，不提倡对药材提早采收。
　　 此外，采用相同的供试品溶液制备方法与色谱检测方法，对组织培养的铁皮石斛材料及其他石斛品种进行了指纹图谱的研究，分别获得了各自的色谱指纹图谱。最终不同来源、不同石斛品种的色谱图相似度较低，说明培养到不同阶段的铁皮石斛材料组织培养物，其化学成分相差较大。而石斛品种不同，其化学成分差异也较大。
　　 栽培铁皮石斛多糖、氨基酸、蛋白质含量的测定结果表明，9月份是各成分在药材植物体内转化的关键时期，建议在栽培过程中，着重加强对这一时期的管理。
　　 不同产地野生铁皮石斛多糖、氨基酸、蛋白质含量各不相同，表明产地条件对药材化学成分影响较大，有必要对药材进行GAP规范化种植。
　　 石斛品种不同，各化学成分含量各不相同。其中，美花石斛的多糖、氨基酸、蛋白质含量均较高与其他石斛品种。