中药材牛大力离体培养与繁育的研究

摘要

本论文从七个方面对中药材牛大力离体培养与繁育进行研究，分别为:(1)外植体灭菌试验;(2)愈伤组织诱导试验;(3)愈伤组织分化试验;(4)无菌芽增殖试验;(5)无菌苗瓶内生根试验;(6)无菌苗瓶外生根试验(7)无菌生根苗移栽试验。主要研究结果如下:
　　 1.牛大力外植体灭菌试验效果
　　 (1)牛大力种子外植体灭菌的最适宜组合为:0.1％HgCl2灭菌时间20min+浸泡无菌水5个小时，污染率为40％，种子生根率达83.3％。
　　 (2)牛大力茎段外植体灭菌的最适宜组合为:0.1％HgCl2灭菌时间20min，污染率为40％，茎段外植体萌芽率为37.5％。
　　 2.牛大力愈伤组织诱导试验效果
　　 牛大力愈伤组织诱导最佳的激素组合是:MS+2，4-D2.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+TDZ0.03 mg/L，对嫩叶柄的诱导效果最佳，出愈率为100％，褐化率为0。
　　 3.牛大力愈伤组织分化试验效果
　　 在愈伤组织分化试验中，以MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+TDZ0.03 mg/L组合对嫩茎段所诱导出来的愈伤组织，在分化培养基MS+6-BA0.5 mg/L+KT1.0 mg/L+IAA0.3 mg/L培养90天分化效果最佳，芽分化率为10％。
　　 4.牛大力无菌芽增殖试验效果
　　 (1) MS基本培养基比Miller和改良White更利于牛大力无菌芽的增殖，芽增殖倍数为3.60倍(30d)和5.33倍(60d)。
　　 (2)在细胞分裂素6-BA、KT及其浓度比较试验中，以MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L组合，对芽增殖倍数最高，为3.70倍(30d)和5.43倍(60d)。
　　 (3)在不同生长素及其浓度比较试验中，以MS+IAA0.2mg/L+6-BA3.0mg/L组合，芽增殖倍数最高，为4.38倍(30d)和6.55倍(60d)。
　　 (4)在两种细胞分裂素组合及其浓度比较试验中，以MS+TDZ0.03 mg/L+6-BA3.0mg/L+IAA0.2 mg/L组合，对芽增殖倍数最高，达6.00倍(30d)和9.65倍(60d)。
　　 (5)在无菌芽接种方式比较试验中，以单芽的芽增殖倍数最高，达5.34倍(30d)和10.63倍(60d)。
　　 (6)在不同蔗糖用量比较试验中，以蔗糖30 g/L的用量，对芽增殖倍数最高，为4.30倍(30d)和6.4倍(60d)。
　　 (7)有机物椰子汁的添加有利于牛大力芽增殖，以椰子汁浓度为15％时，芽增殖倍数最高，达5.82倍(30d)和8.12倍(60d);马铃薯汁、香蕉汁的添加均不利于牛大力芽增殖。
　　 5.牛大力无菌苗瓶内生根试验效果
　　 (1)在单因子激素比较试验中，以1/2MS+ABT2.0 mg/L生根率最高为27％。
　　 (2)在双因子激素组合比较试验中，以1/2MS+IBA3.0mg/L+NAA1.0 mg/L组合生根率最高为67.5％。
　　 6.牛大力无菌苗瓶外生根试验效果
　　 牛大力无菌苗瓶外生根最佳处理组合为:ABT500 mg/L浸泡12小时+移栽到进口花卉基质:珍珠岩(2∶1)的基质上，移栽30天的成活率和生根率，分别为100％和81.3％。
　　 7.牛大力无菌生根苗移栽试验效果
　　 牛大力无菌生根苗移栽最佳基质组合为:进口花卉基质:珍珠岩(2∶1)，移栽30天，无菌生根苗成活率为94％。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

1 前言

1．1 牛大力的概述

1．1．1 牛大力的来源与分布

1．1．2 牛大力的鉴别

1．2 牛大力的化学成分研究

1．3 牛大力药理作用研究

1．3．1 调节免疫功能的作用

1．3．2 祛痰、镇咳平喘作用

1．3．3 保肝作用

1．3．4 辐射损伤保护和修复作用

1．4 牛大力组织培养

1．4．1 外植体消毒灭菌

1．4．2 牛大力无菌芽增殖

1．4．3 牛大力组培苗生根与移栽

1．5 本课题研究的目的及意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 牛大力外植体灭菌试验材料

2．1．2 牛大力愈伤组织诱导试验材料

2．1．3 牛大力愈伤组织分化试验材料

2．1．4 牛大力芽增殖试验材料

2．1．5 牛大力瓶内生根试验材料

2．1．6 牛大力瓶外生根试验材料

2．1．7 牛大力移栽试验材料

2．2 试验和仪器设备

2．2．1 试验药品

2．2．2 仪器设备

2．3 试验方法

2．3．1 牛大力外植体的选取、处理试验方法

2．3．2 牛大力愈伤组织诱导试验方法

2．3．3 牛大力愈伤组织分化试验方法

2．3．4 牛大力芽增殖试验方法

2．3．5 牛大力试管苗瓶内生根试验方法

2．3．6 牛大力试管苗瓶外生根试验方法

2．3．7 牛大力试管苗移栽试验方法

2．4 培养条件

2．5 试验统计指标及资料分析

3 试验设计

3．1 牛大力外植体灭菌试验设计

3．1．1 0．1％HgCl2不同灭菌时问及泡水处理对牛大力种子灭菌的试验设计

3．1．2 15％NaClO灭菌10min与0．1％HgCl2不同灭菌时间及泡水处理对牛大力种子灭菌的试验设计

3．1．3 0．1％HgCl2不同灭菌时间对牛大力茎段外植体灭菌的试验设计

3．2 牛大力愈伤组织诱导试验设计

3．2．1 不同激素组合对牛大力嫩茎段、嫩叶柄和嫩叶片愈伤组织诱导的试验设计

3．3 牛大力愈伤组织分化试验设计

3．3．1 不同激素组合对牛大力嫩茎段、嫩叶柄和嫩叶片愈伤组织分化的试验设计

3．4 牛大力无菌芽增殖试验设计

3．4．1 不同基本培养基MS、Miller、改良White对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．2 不同浓度6-BA、KT与NAA0．2mg／L组合对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．3 不同生长素NAA、IBA、IAA与6-BA组合对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．4 不同浓度生长素IAA与6-BA组合对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．5 不同浓度CPPU与6-BA+IAA组合对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．6 不同浓度TDZ与6-BA+IAA组合对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．7 不同接种芽部位对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．8 单芽、丛芽接种对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．9 不同接种芽数对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．10 不同蔗糖用量对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．11 有机物椰子汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．12 有机物马铃薯汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．4．13 有机物香蕉汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的试验设计

3．5 牛大力瓶内生根试验设计

3．5．1 不同浓度NAA对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．2 不同浓度IBA对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．3 不同浓度IAA对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．4 不同浓度ABT对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．5 不同浓度NAA+ABT2．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．6 不同浓度IBA+ABT2．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．5．7 不同浓度IBA+NAA1．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的试验设计

3．6 牛大力瓶外生根试验设计

3．6．1 不同激素及时间处理对牛大力试管苗瓶外生根的试验设计

3．6．2 ABT不同时间处理对牛大力试管苗瓶外生根的试验设计

3．7 牛大力移栽试验设计

3．7．1 不同基质及其配比对牛大力生根苗移栽的试验设计

3．7．2 进口花卉基质与珍珠岩不同配比对牛大力生根苗移栽的试验设计

4 试验结果与分析

4．1 牛大力外植体灭菌试验结果

4．1．1 0．1％HgCl2不同灭菌时间及泡水处理对牛大力种子灭菌的影响

4．1．2 15％NaClO灭菌10min与0．1％HgCl2不同灭菌时间及泡水处理对牛大力种子灭菌的影响

4．1．3 0．1％HgCl2不同灭菌时间对牛大力茎段外植体灭菌的影响

4．2 牛大力愈伤组织诱导结果

4．2．1 不同激素组合对牛大力嫩茎段、嫩叶柄和嫩叶片愈伤组织诱导的影响

4．3 牛大力愈伤组织分化影响

4．3．1 不同激素组合对牛大力嫩茎、叶柄和叶片愈伤组织分化的影响

4．4 牛大力无菌芽增殖影响

4．4．1 不同培养基MS、Miller、改良White对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．2 不同浓度6-BA、KT与NAA0．2mg／L组合对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．3 不同生长素NAA、IBA、IAA与6-BA组合对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．4 不同浓度生长素IAA与6-BA组合对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．5 不同浓度CPPU与6-BA+LAA组合对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．6 不同浓度TDZ与6-BA+IAA组合对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．7 不同接种芽部位对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．8 单芽、丛芽接种对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．9 不同接种芽数对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．10 不同蔗糖用量对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．11 有机物椰子汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．12 有机物马铃薯汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的影响

4．4．13 有机物香蕉汁及其浓度对牛大力无菌芽增殖的影响

4．5 牛大力瓶内生根结果

4．5．1 不同浓度NAA对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．2 不同浓度IBA对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．3 不同浓度IAA对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．4 不同浓度ABT对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．5 不同浓度NAA+ABT2．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．6 不同浓度IBA+ABT2．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的影响

4．5．7 不同浓度IBA+NAA1．0 mg／L组合对牛大力无菌苗生根的影响

4．6 牛大力瓶外生根试验结果

4．6．1 不同激素及时间处理对牛大力试管苗瓶外生根的影响

4．6．2 ABT不同时间处理对牛大力试管苗瓶外生根的影响

4．7 牛大力移栽试验结果

4．7．1 不同基质及其配比对牛大力无菌生根苗移栽的影响

4．7．2 进口花卉基质与珍珠岩不同配比对牛大力无菌生根苗移栽的影响

5 讨论

5．1 牛大力外植体灭菌的影响因子

5．2 牛大力无菌苗愈伤组织诱导及分化成苗的影响因子

5．3 牛大力无菌芽增殖的影响因子

5．3．1 不同培养基MS、Miller、改良White对牛大力无菌芽增殖的影响

5．3．2 细胞分裂素是牛大力芽增殖的主要外源激素

5．3．3 不同生长素NAA、IBA、IAA与6-BA组合与牛大力芽增殖的影响

5．3．4 细胞分裂素CPPU和TDZ在牛大力芽增殖中的作用

5．3．5 三因子激素组合比双因子激素组合更利于牛大力芽增殖

5．3．6 不同接种方式对牛大力芽增殖的影响

5．3．7 蔗糖是影响牛大力芽增殖的影响重要因子

5．3．8 不同有机添加物及其浓度对牛大力的影响

5．4 牛大力无菌苗生根的影响因子

5．5 牛大力无菌生根苗移栽的影响因子

6．结论

致谢

参考文献

附录A

附录B

附录C