广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因表达水平与脂肪性状的相关研究

摘要

鸡肉品质受遗传和环境因素共同影响，但遗传因素起决定作用。广西三黄鸡是广西优良的地方品种，其最大的特点之一是肉品质好。本研究的目的是克隆和分析广西三黄鸡和艾维茵鸡的PPARγ和UCP3基因序列;研究PPARγ和UCP3在广西三黄鸡和艾维茵鸡不同组织、不同性别、不同日龄的表达谱;探讨了PPARγ和UCP基因的表达与体重、腹脂重、腹脂率和肌内脂肪相关性;旨在从分子水平揭示鸡肉品质的遗传机制，加快广西优质鸡的选育。
　　 参照GenBank上公布的鸡PPARγ(AF163811)和UCP3(AF287144)基因，设计特异性引物，克隆了广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因。结果显示，广西三黄鸡PPARγ基因的编码区序列全长1428bp，提交GenBank获得序列号为KC682870，与参考序列相比，存在4处碱基突变(C291T、G675T、C942T、C1119T)，均为同义突变，未造成氨基酸的改变。广西三黄鸡UCP3基因的编码区序列全长921bp，提交GenBank获得序列号为KC682890，与参考序列相比，存在3处碱基突变(T363G、T399C、C666T)，均为同义突变，未造成氨基酸的改变。
　　 利用实时荧光定量PCR对广西三黄鸡和艾维茵鸡不同日龄、不同性别和不同组织的PPARγ和UCP3基因表达进行分析，结果表明PPARγ基因在腹脂中高表达，其次是皮下脂，而在心、肝、胸肌、腿肌中表达量少，并存在显著的品种、性别差异(P＜0.01); UCP3基因高表达于胸肌，其次是腿肌，在心、肝、腹脂、皮下脂中表达甚少，也存在显著的品种、性别差异(P＜0.01)。同日龄，母鸡PPARγ基因相对表达量高于公鸡（P＜0.01），母鸡的UCP3基因相对表达量低于公鸡(P＜0.01);广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因表达量普遍高于艾维茵鸡。候选基因相对表达量与脂肪性状的关联性分析表明，PPARγ基因的表达量与腹脂重、UCP3基因的表达量与IMF值呈显著正相关（R2＞0.7，P＜0.01）。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．鸡肉品质的研究进展

2．过氧化物酶体增殖蛋白激活受体基因(PPARs)

2．1 PPARγ基因的结构及生物学功能

2．2 PPARγ基因研究进展

3 解偶联蛋白受体基因(UCP)

3．1 UCP3的结构及生物学功能

3．2 UCP3基因的研究进展

4 PPARγ基因与UCP3基因的关系

5 本研究目的和意义

第二章 广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因的克隆与序列分析

1 试验材料

1．1 组织样品来源及日粮营养水平

1．2 主要仪器

1．3 酶类及主要药品试剂

1．4 主要试剂的配制

2 试验方法

2．1 引物设计

2．2 总RNA提取

2．3 PPARγ和UCP3基因目的片段的合成

2．4 PPARγ和UCP3目的片段的PCR扩增

2．5 PCR产物的回收纯化

2．6 目的片段与PMD18-T载体的连接

2．7 重组质粒转化细菌

2．8 阳性菌株的筛选

2．9 重组质粒PCR鉴定

2．10 质粒的抽提

3 结果与分析

3．1 广西三黄鸡总RNA的提取

3．2 广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因的RT-PCR扩增

3．3 重组质粒菌液PCR鉴定

3．4 广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因目的片段测序结果

3．5 同源性比较及亲缘进化树分析

4、讨论

4．1 PPARγ基因同源性分析

4．2 UCP3基因同源性分析

第三章 广西三黄鸡PPARγ和UCP3基因相对表达与脂肪性状的关联性分析

1 试验材料

1．1 实验样本

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

2 试验方法

2．1 引物设计与合成

2．2 组织样总RNA的提取

2．3 反转录

2．4 PPARγ、UCP3、β-actin基因标准品的制备及标准曲线的建立

2．5 PPARγ、UCP3基因的相对表达量

2．6 荧光定量数据处理及统计分析

2．7 PPARγ、UCP3基因相对表达与脂肪性状关联性分析

3 实验结果

3．1 各时期各组织总RNA的提取

3．2 PPARγ、UCP3和β-actin基因的标准曲线制备

3．3 PPARγ和UCP3基因的相对表达差异

4 讨论

4．1 实时荧光定量PCR方法标准曲线的制备

4．2 PPARγ和UCP3基因在广西三黄鸡及艾维茵鸡中的表达分析

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况