广西陆川猪呼吸道疾病综合征的流行病学调查及猪圆环病毒2型的分离鉴定

摘要

为了摸清近年来广西陆川县纯种陆川猪群中猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC),即猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type2,PCV2)、猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)、猪链球菌(Streptococcus Suis,SS)、猪附红细胞体(Swine Eperythrozoon,E.suis)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumonia,APP)以及最近报道的协同病原猪细环病毒(Torque torque sus virus,TTSuV)等疾病的流行情况,并为制订一套适合陆川猪养殖实际及陆川猪呼吸道主要相关疫病综合防控技术和诊断技术规范提供理论基础,2012年3月至2013年12月期间,对广西23个陆川猪猪场及养殖户采集到的650份血清样品应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)分别进行了PCV2、Mhp、PRRSV及APP的血清学检测,其中,未免疫苗的哺乳仔猪的抗体阳性率分别为74.67％、34.38%、41.82%以及12.00%,保育猪的抗体阳性率分别为76.72%、57.89%、60.00%以及17.24%,育肥猪的抗体阳性率分别为91.06%、79.36%、68.00%以及12.34%,母猪\后备母猪\公猪的抗体阳性率分别为85.71%、27.66%、40.00%以及47.77%。对131份组织样品采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和反转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法分别进行了PCV2、Mhp、PRRSV、SS、E.suis、HPs、APP以及协同病原TTSuV1、TTSuV2的病原学检测,病原阳性率分别为50.38%(66/131)、21.37%(28/131)、9.92%(13/131)、12.21%(16/131)、27.48%(36/131)、4.58%(6/131)、0.00%(0/131)、28.24%(37/131)、42.75%(56/131),其中,PCV2、E.suis、TTSuV1及TTSuV2感染最为严重。在99份阳性样品中,单一感染的样品只有26份,PRDC多表现为混合感染,两种以上病原体混合感染的样品占73.74%(73/99),从混合感染的模式看,陆川猪的呼吸道疾病多以二重和三重感染类型为主,其占混合感染样品的阳性率分别为34.25%(25/73)、32.88%(24/73);在混合感染的病原体中,以PCV2混合其它病原感染是最为常见的感染类型,其占混合感染样品的73.97%(54/73),而对陆川猪呼吸道敏感的Mhp仅占34.25%(25/73)。从抗原和抗体检测结果表明,陆川猪猪场普遍存在PRDC的相关病原感染,但各阶段猪群之间PRDC的感染状况不尽相同。
　　本研究为给陆川猪感染最严重的PCV2的流行变异情况提供基础资料及其相关疾病的防制提供参考,采用PCR方法将经双抗及滤器处理过的陆川猪PCV2阳性病料接种到PCV阴性的PK-15细胞上,盲传8代后,抽提细胞毒的DNA,用PCR方法和间接免疫荧光试验(Indirect immunoinfluscent assay,IFA)鉴定后,表明已分离到具有感染性的两株 PCV2毒株,分别命名为LCa株和LCb株。克隆分离株的全基因组,并对序列进行测定分析,结果表明,两株毒株全基因组长均为1767 bp,分离株之间的全基因组核苷酸同源性为99.0%,与 GenBank上发表的国内外参考毒株的同源性为94.9%~99.1%,与国内外参考毒株之间的核苷酸同源性差异不大,其进化不存在明显的地域相关性。分离株的ORF1的基因长度均为945 bp,其ORF1基因之间的核苷酸和其所推导的氨基酸同源性均为99.9%以上,非常保守。分离株的ORF2基因长度为702 bp,其ORF2基因之间的核苷酸和其所推导的氨基酸同源性分别为99.3%和98.7%,较保守。遗传进化分析表明两株分离株均属于PCV2b亚型。

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第一章 文献综述

1 陆川猪养殖与疾病现状

2 PRDC研究概况

3 PRDC的主要病原研究进展概述

4 研究的目的和意义

第二章 陆川猪PRDC的流行病学调查

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第三章 陆川猪PCV2的分离鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第四章 全文结论

参考文献

附录：英文缩写对照表