RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响

摘要

GnIH是日本科研团队在鹌鹑的脑内发现的一种C端具有RF酰胺结构的新型神经肽。后来，在哺乳动物上也发现具有RF酰胺结构的神经肽，这种RF酰胺肽被命名为RF相关肽(RFRP)，其中RFRP-3与鸟类的GnIH生理作用一致。目前，在附睾水平研究RFRP-3对雄性动物生殖功能影响的相关研究还很少。本研究通过检测了不同发育阶段大鼠附睾中RFRP-3和GPR147mRNAs的表达情况;然后通过体内实验，检测不同剂量RFRP-3对大鼠附睾形态学、凋亡和自噬相关蛋白表达的影响，探究RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响。
　　本研究可分为三个部分:(1)检测20、40、60、80日龄大鼠的附睾中RFRP-3和GPR147mRNAs表达的变化（分别对应P20、P40、P60和P80）。结果显示，RFRP-3和GPR147mRNAs的表达水平随着大鼠附睾发育呈现波动性变化，在P60处RFRP-3和GPR147mRNAs的表达水平最高，提示RFRP-3及其受体可能参与大鼠附睾的发育并调控其生殖活动。(2)通过体内实验，观察RFRP-3对大鼠附睾组织形态的影响。将大鼠分为对照组和0.1μg，1μg和10μg/天不同剂量组，每组6只。连续7天对大鼠睾丸内注射RFRP-3后，摘除一侧的附睾制作石蜡切片、HE染色，在显微镜下进行观察。结果显示，RFRP-3能呈剂量依赖性的导致附睾上皮细胞发生异常，并使附睾内精子数量显著降低，提示RFRP-3诱导附睾呈现功能性衰退。(3)通过对大鼠附睾中凋亡、自噬的水平进行检测，研究RFRP-3引起大鼠附睾功能性衰退的机制。一方面，我们检测到RFRP-3可以诱导附睾组织中Caspase-3的活性增加。另一方面，通过Western blot检测发现不同剂量的RFRP-3引起附睾中凋亡、自噬标志蛋白质的表达出现相互矛盾的结果，这提示细胞凋亡和自噬之间有着复杂的相互作用。
　　综上所述，RFRP-3对雄性大鼠附睾的生殖功能起着重要的调控作用，可能是因为RFRP-3介导了附睾的细胞凋亡和自噬。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一章 文献综述

1．1．2 RFRP-3／GnIH的结构

1．1．3 RFRP-3／GnIH的分布

1．2 RFRP-3／GnIH的生理功能

1．2．2 RFRP-3／GnIH与季节性繁殖

1．2．4 RFRP-3／GnIH对应激的影响

1．2．5 RFRP-3／GnIH的作用机制

1．3 RFRP-3／GnIH受体的研究进展

1．3．3 GPR147的分布

1．4 凋亡与自噬的研究进展

1．4．1 细胞凋亡

1．4．2 细胞自噬

1．5 本研究的目的和意义

第二章 RFRP-3及其受体GPR147在大鼠附睾中的发育学表达变化

2．1 材料

2．1．1 主要试剂

2．1．2 主要仪器

2．1．3 试验动物

2．2 方法

1．2．1 试验动物处理

1．2．2 总RNA的提取

2．2．3 cDNA的合成

2．2．4 半定量RT-PCR法检测RFRP-3和GPR147mRNAs表达水平

2．2．5 数据统计分析

2．3 结果

2．4 讨论

2．5 小结

第三章 RFRP-3对大鼠附睾形态学变化的影响

3．1 材料

3．1．1 主要试剂

3．1．2 主要仪器

3．1．3 试验动物

3．2 方法

3．2．1 试验动物处理

3．2．2 附睾组织石蜡包埋及切片

3．2．3 附睾组织的HE染色

3．3 结果

3．4 讨论

第四章 RFRP-3对大鼠附睾凋亡及自噬的影响

4．1 材料

4．1．1 试剂与仪器

4．1．2 试验动物及取材

4．2 方法

4．2．2 制备蛋白样品

4．2．3 电泳胶的配制

4．2．4 Western blot

4．2．5 数据统计分析

4．3 结果

4．3．3 RFRP-3对附睾自噬标记蛋白表达的影响

4．4 讨论

4．5 小结

全文总结

参考文献

致谢