广西牛羊主要呼吸道疫病调查

摘要

为了掌握广西牛羊业呼吸道疫病的感染情况，本研究从血清和病原两方面展开调查，调查情况与结果如下:
　　(1)对2016-2017年广西贵港、来宾、贺州、柳州、南宁、百色6市的牛血清2400份进行传染性牛鼻气管炎、牛支原体的抗体检测，羊血清2400份进行绵羊肺炎支原体的抗体检测。
　　传染性牛鼻气管炎抗体检测结果显示，2016年广西传染性牛鼻气管炎抗体的个体阳性率为27.33％(328/1200)，群体阳性率为58.93％(33/56)，其中，贵港、贺州、百色、柳州、南宁、来宾的传染性牛鼻气管炎抗体个体阳性率分别为17.5％(35/200)、22.5％(45/200)、51％(102/200)、34％(68/200)、22％(44/200)、17％(34/200)，群体阳性率分别为42.9％(3/7)、71.4％(5/7)、80％(8/10)、50％(5/10)、62.5％(10/16)、33.3％(2/6);而2017年广西传染性牛鼻气管炎抗体的个体阳性率为45.58％(547/1200)，群体阳性率81.82％(63/77)，其中，贵港、贺州、百色、柳州、南宁、来宾的牛鼻气管炎抗体个体阳性率分别为15.5％(31/200)、53.5％(107/200)、81％(162/200)、43％(86/200)、48.5％(97/200)、32％(64/200)，群体阳性率分别为58.3％(7/12)、100％(6/6)、95％(14/15)、80.3％(12/15)、82.35％(14/17)、85.7％(6/7)。与2016年相比，2017年广西的传染性牛鼻气管炎的感染呈上升趋势。
　　牛支原体抗体的检测结果显示，2016年广西牛支原体抗体的个体阳性率为23.33％(280/1200)，群体阳性率为59.2％(36/61)，其中贵港、来宾、贺州、柳州、南宁、百色的牛支原体抗体个体阳性率分别为28％(56/200)、48.5％(97/200)、20％(40/200)、2％(4/200)、27％(54/200)、14.5％(29/200)，群体阳性率分别为66.6％(8/12)、71.4％(5/7)、80％(8/10)、30％(3/10)、56.25％(9/16)、50％(3/6);而2017年广西牛支原体抗体的个体阳性率为38.5％(462/1200)，群体阳性率为74.62％(50/67)，其中贵港、来宾、贺州、柳州、南宁、百色的牛支原体抗体个体阳性率分别为46.5％(93/200)、54.5％(109/200)、46％(92/200)、29％(58/200)、34％(68/200)、21％(42/200)，群体阳性率分别为85％(6/7)、100％(6/6)、93％(14/15)、60％(9/15)、58.8％(10/17)、62.8％(5/7)。与2016年相比，广西牛支原体的感染率呈上升趋势。
　　传染性牛鼻气管炎与牛支原体的双重感染率为12.21％(293/2400)。双重感染数占感染数的比率分别为33.48％(293/875)和39.48％(293/742)，感染传染性牛鼻气管炎继发感染牛支原体的概率大于感染牛支原体继发感染传染性牛鼻气管炎的概率。
　　绵羊肺炎支原体抗体的检测结果显示，2016年广西绵羊肺炎支原体抗体的个体阳性率为32.2％(386/1200)，群体阳性率为72.88％(43/59)，其中贵港、来宾、贺州、柳州、南宁、百色的绵羊肺炎支原体抗体个体阳性率分别为47％(94/200)、28.5％(57/200)、27％(54/200)、16％(32/200)、36％(72/200)、38.5％(77/200)，群体阳性率分别为75％(6/8)、62.5％(7/8)、78.57％(11/14)、63.6％(7/11)、87.5％(7/8)、50％(5/10);而2017年广西绵羊肺炎支原体抗体的个体阳性率为49.2％(590/1200)，群体阳性率为82.61％(38/46)，其中贵港、来宾、贺州、柳州、南宁、百色的绵羊肺炎支原体抗体个体阳性率分别为78％(156/200)、54％(108/200)、38％(76/200)、33％(66/200)、43％(86/200)、48％(96/200)，群体阳性率分别为84.61％(11/13)、83.33％(5/6)、83.33％(5/6)、66.6％(4/6)、87.5％(7/8)、85.7％(6/7)。与2016年相比，广西绵羊肺炎支原体感染率显著上升。
　　(2)采用PCR/RT-PCR法、细菌分离鉴定等对2015-2017年广西全区送检呼吸道症状牛病料63份，羊病料73份进行检测，并对分离到的7株牛支原体进行致病力试验和药敏试验。牛羊呼吸道症状的主要病原为牛支原体30.86％(25/81)，多重感染率为28.57％(18/63)，羊支原体49.63％(68/137)，多重感染率为73.97％(54/73)。牛羊溶血曼氏杆菌的检出率为12.84％(28/218)。此外，在牛病料中还检测到溶血曼氏杆菌13.58％(11/81)，肺炎克雷伯氏菌11.11％(9/81)，化脓隐秘杆菌8.64％(7/81);在羊病料中还检测到溶血曼氏杆菌12.41％(17/137)，肺炎克雷伯氏菌5.84％(8/137)，化脓隐秘杆菌5.84％(8/137)。分离到的7株牛支原体Guangxi Shanglin YS株致病力最强，Guangxi Guilin gl2株致病力最弱。药物敏感性试验得出7株牛支原体对氟喹诺酮类药物和大环内酯类药物敏感，对β-内酰胺类药物耐药，四环素和氨基糖苷类药物中介。
　　(3)对分离到的7株牛支原体克隆表面膜蛋白P81基因和表面可变脂蛋白vspY1基因，进行PCR扩增、克隆和序列分析。序列分析显示，7株牛支原体表面膜蛋白P81基因在种间较保守，变异小;而表面可变脂蛋白vspY1基因变异较大。采用在线分析站点进行抗原性分析，结果显示表面可变脂蛋白vspY1基因的主要抗原位点为241-266位，氨基酸序列为“ELQKKYASLLPIVTEFFKLHEKIVSK”
　　(4)以溶血曼氏杆菌的唾液酸蛋白酶sialoglycoprotease(Gcp)基因为靶基因，设计环介导等温扩增法(LAMP)的检测引物，建立的LAMP方法特异性高，灵敏度与PCR一致，在25min内完成检测，较PCR方法缩短了3.5倍。应用建立的LAMP方法与PCR方法同时对10份溶血曼氏杆菌病例进行检测，符合率为100％。
　　结论:(1)2017年广西6市的传染性牛鼻气管炎、牛支原体、绵羊肺炎支原体血清抗体的个体阳性率和群体阳性率均较2016年有所增加。(2)2015-2017年广西牛羊主要的呼吸道病原分别是牛支原、绵羊肺炎支原体;以多重感染为主。(3)广西分离的牛支原体表面膜蛋白P81基因变异小，表面可变脂蛋白vsp Y1基因变异较大。(4)本研究建立了一种溶血曼氏杆菌LAMP法，可应用于临床检测。

目录

声明

摘要

论文中涉及的主要英文缩写对照表

第一章 文献综述

1 传染性牛鼻气管炎的研究进展

1．1 命名

1．2 结构

1．3 临床症状

1．4 流行病学

1．5 诊断方法

1．6 预防控制

2 牛支原体的研究进展

2．1 命名

2．2 结构

2．3 主要功能蛋白

2．4 流行病学

2．5 临床症状

2．6 诊断方法

2．7 预防

3 绵羊肺炎支原体的研究进展

3．1 命名

3．2 结构

3．3 流行病学

3．4 临床症状

3．5 诊断方法

3．6 预防治疗

4 溶血曼氏杆菌病的研究进展

4．1 病原

4．2 结构

4．3 功能蛋白

4．4 临床症状

4．5 诊断

4．6 预防

5 本研究的目的和意义

第二章 广西牛羊部分主要呼吸道疾病血清学检测

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 传染性牛鼻气管炎的抗体检测结果

2．2 牛支原体的抗体检测结果

2．3 绵羊肺炎支原体的抗体检测结果

3 讨论

4 小结

第三章 广西牛羊呼吸道疾病病原分离鉴定

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 广西牛羊病2015-2017年的病原学检测结果

2．2 牛支原体致病力结果

2．3 牛支原体药敏结果

3 讨论

4 小结

第四章 牛支原体主要抗原基因的变异分析

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．2 牛支原体P81基因和vspY1基因的序列分析结果

3 讨论

4 小结

第五章 溶血曼氏杆菌的环介导等温扩增检测方法的建立

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 溶血性曼氏杆菌的灵敏性对比

2．2 环介导等温扩增法的定量回归方程

2．3 溶血曼氏杆菌LAMP检测法的应用

3 讨论

4 小结

全文结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况